97g蛋白在大肠埃希菌中的表达纯化复性及活性测定 - 复旦学报(医学版).pdfVIP

复旦学报医学版 蛋白在大肠埃希菌中的表达 纯化复性及活性测定 常冰梅 刘晓军 李美宁 张悦红 程牛亮 牛 勃 山西医科大学生物化学与分子生物学教研室 细胞生理学省部共建教育部重点实验室 太原 中国医学科学院基础医学研究所 北京 首都儿科研究所 北京 摘要 目的 在大肠埃希菌 中高表达 蛋白经鉴定纯化复性后测定其生物 学活性方法 采用重组 技术对已有质粒 和 进行改造构建质粒 并将其转化 温控诱导表达目的蛋白 蛋白鉴定采用 和 蛋白纯化采用包涵体超声破碎洗涤和 凝胶过滤层析经梯度稀释复性后采用 法和免疫 细胞化学方法检测重组蛋白 对人脐静脉内皮细胞 增殖的作用结果 重组质粒 酶切图谱和序列测定与预期一致 显示有分子量 的目的蛋白表达量为 结果证实目的蛋白带有 的氨基端经包涵体洗涤层析后 的纯度为 复性后的 可抑制 增殖并抑制 增殖细胞核抗原