环境微生物实验报告实验七.PDF

環　境　微　生　物 實　驗　報　告 實 驗 七 實驗名稱 直接計數法 : 實驗日期: 4 月22 日 繳交日期: 4 月29 日 實驗組別 第四組 : 實驗人員姓名 梁維 王靖雯 邱文綺 葉書甫 : • 原理 總菌數測定是計算微生物數量的直接方法，可分為直接計數及間接計數二類。其 中直接計數是利用不同的計數器或載玻片(有界線或一般載波片)在顯微鏡下直接觀 察，計算微生物細胞的總數量。此方法有優點為方便、快速、節省時間；缺點是 無法辨識是否為微生物或只是玻片上看不清楚的黑影，不分微生物未能沉降或為 死亡狀態，以肉眼觀察計數的誤差極大。直接計數的目的為計數並非觀察，所以 只須能辨別出菌體即可。以下介紹直接計數的三種方法: 1. 血球計數法 血球計數器為直接計數法中最常用的方法，計數器(圖1)上凹槽有一邊長 1mm 的正 方形格子，該格內分為25 個大方格(5x5) ，每一大方格再細分16 小方格(4x4) ，因 此每小方格的邊長為0.05 mm(=1÷5÷4) 。在高度方面，蓋上蓋玻片後，玻片與計數 3 2 器的間距恰好為0.1 mm ，故每小格的體積0.00025mm (=0.05 x0.1) 。實驗時滴入菌液蓋 上蓋玻片(22mmx22mm) ，使菌一充滿計數器凹槽中，接著以顯微鏡觀察計算小方格 內菌體數量，即可球得擔味體基樣品之總菌數(個 /ml 或個 /cm) 。 圖 1 2. 有界線載玻片 有界線載玻片是在載玻片的表面上刻有間隔 1mm 的平行線，其實驗首先以滴管吸 取0.05ml 的待測水樣，滴於載玻片上並蓋上蓋玻片。接著計算(共進行2~5 次)在顯 微鏡上放大 100 被實，沿線條出現每種微生物的個數。若有群體出現的微生物，每 個相連的群體當成一個個體計算。 3. 一般載玻片 廢(汙)水處理場或汙染現場(on-site)其設備及操作條件較實驗室差，不一定能以上述 方法進行計數，有時為了快速地推估微生物數量，可利用簡略方法，即於光學顯 微鏡放置一般載玻片進行觀察計數。唯進行時，應將佈滿整個蓋玻片的微生物全 部計數，並重複2~3 次。此法因載玻片上無格線或標示，很容易計算錯誤。 本次實驗即是讓學生以血球計數法練習總菌數測定，實驗中可讓同學熟悉直接計 數的原理，以及如何利用血球計數器與光學顯微鏡等設備進行總菌數直接測定。  實驗步驟 取0.5g酵母粉加於 50ml 培養液中，均勻搖晃。＞將酵母菌液進行連續10 倍 稀釋。＞量測吸光值＞利用UV-vis spectrophotometer 測菌液吸光值＞放入原液 進行歸零校正＞放入稀釋之菌液進行吸光值測定＞吸光值最好介於2~0.01 之 間 如果未介於應捨棄不用＞以血球計數器算菌數＞吸取稀釋好之菌液，滴 於血球計數器之中央再蓋上專用蓋波片＞以顯微鏡觀察計算菌數  實驗數據 1. 吸光值 稀釋倍數 吸光值 原液 1.692 10-1 0.675 10-2 0.069 10-3 0.016 10-4 0.005 10-5 0.004 2. 原液菌數 次數