脉络丛 Neuro2A细胞株对胚胎脊髓运动神经元轴突的排斥作用 .docVIP

　　脉络丛 Neuro2A细胞株对胚胎脊髓运动神经元轴突的排斥作用 【摘要】 目的： 探讨脉络丛组织、Neuro2A细胞株对胚胎脊髓运动神经元轴突生长的影响。方法： 采用ECM Gel作为组织培养的基质底物，将脉络丛组织或者Neuro2A细胞株和胚胎12天的腹侧脊髓运动神经柱进行三维共培养，观察脉络丛组织或者Neuro2A细胞株对胚胎脊髓运动神经元轴突生长的影响。结果： 脉络丛组织或者Neuro2A细胞株与胚胎12天的腹侧脊髓组织共培养2天后，脊髓运动神经元轴突表现为偏离脉络丛组织或者Neuro2A细胞株的偏向性生长。 结论： 脉络丛组织和Neuro2A细胞株对胚胎脊髓运动神经元轴突有排斥作用。 【关键词】 Slit2 脉络丛 脊髓运动神经元轴突 维共培养 〔Abstract〕 Objective: To investigate the effect of the choroid plexus or the Neuro2A cells on the embryonic spinal motor axons.Methods： To use ECM Gel as a tissue culture substrate, 3dimention coculture of the choroids plexus or the Neuro2A cells bryonic spinal motor column (Embryonic 12 days, E12)ade in the substrate.To observe the effect of the choroid plexus or the Neuro2A cells on the embryonic spinal motor axons. Results： After 2 days of coculture,ore spinal motor axons the distal part of the choroid plexus or the Neuro2A cells. Conclusion： The choroid plexus and the Neuro2A cells had the repelling effect on embryonic spinal motor axons. 〔Key bryonic spinal motor axons; 3dimention coculture 神经细胞迁移和轴突导向是神经系统发育和再生过程中的重要问题。目前发现一系列与神经迁移和神经元轴突导向有关的分子,如Slit, Netrin, Semaphorin, Ephrin等〔1〕。 Slit和其受体Robo(roundabout)是目前研究较热的一对轴突导向分子，其研究主要集中在神经系统发育方面，特别是对于调控联合神经元轴突穿越中线的作用研究已成为热点〔2〕；而对于中枢神经损伤后再生作用机制的研究较少〔3〕。我们建立脉络丛组织、Neuro2A细胞株与胚胎脊髓运动神经柱的三维共培养体系，观察两者对运动神经元轴突生长影响的作用,从脊髓发育角度探索脊髓损伤后的脊髓神经轴突再生、导向的机制。 1 材料和方法 1.1 材 料 1.1.1 实验动物 胚龄分别为12天、19天的SD孕鼠。SD大鼠购于江苏大学实验动物中心。将成熟的雌雄成年SD大鼠合笼后，次日清晨查雌性大鼠，作阴道涂片，见到精子者定为受孕第0天，计为P0。 1.1.2 主要试剂 L15培养基（Gibco公司），DMEM/F12 （Gibco公司），FBS（Gibco公司），PBS（Boster公司），ECM Gel(Sigma公司)，青霉素、链霉素（华北制药股份有限公司）等。 1.1.3 主要实验器材 Eppendorf台式离心机，超净工作台（Airtech公司），CO2 恒温细胞培养箱（Thermo公司），24孔细胞培养板（Corning公司）, 显微手术器械一套，体视显微镜（Olympus公司）,倒置相差显微镜（Olympus公司），滤器（Millipore公司:孔径0.22 μm），玻璃圆盖片（直径：14 mm），一次移液管（Coster公司），一次性注射器（规格1 ml,5 ml）等。 1.2 方 法 1.2.1 胚胎SD大鼠的取材 （1）按要求分别取胚胎12天、19天的SD孕鼠,断颈处死,放置于75%乙醇中浸泡消毒10 min。在超净台中取出乙醇浸泡后的孕鼠,将其仰卧位固定在大鼠解剖台上。无菌操作下取下腹部弧形切口,依次切开皮肤、皮下组织、腹部肌肉，显露双角子宫，在不侵入子宫和刺破羊膜的情况下取出呈现“串珠样”含有胚胎的子宫。（2）将取出的含有胚胎的子宫放置在