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体积排阻色谱法测定低分子量肝素抗凝血因子Xa的活性.pdf
Vo 1. 31 NO.7
2013 年7 月
色译
July 2013 Chinese Journal 01 Chromatography 684 - 690
庆祝欧庆瑜先生八十华诞专栏·研究论文 DOL 10. 3724/SP. J. 1123.2013. 04029
体积排阻色谱法测定低分子量肝素抗凝血因子 Xa 的活性
张倩倩， 康经武*
(中国科学院上海有机化学研究所， 上海 200032)
摘要:发展了一种基于体积排阻色谱测定低分子量肝萦(LMWH)抗凝血活性的方法。 利用肝索与抗凝血酶m ( AT
m ) 综合后可糟强ATm对凝血因子 Xa( FXa)抑制作用的原理，通过测定加入 LMWH 后 FXa 水解其生色底物产生
对硝基苯胶(pNA)这一反应的抑制程度确定 LMWH 的活性。 首先将含有一定浓度 LMWH 的缓冲溶液与 ATm 溶
液混合，然后依次加入 FXa 和生色底物，分别孵育一段时间。 底物被 FXa 水解，产生游离的 pNA。 体积排阻色谱
可将小分子产物pNA 与其他大分子分离开，因而可以在pNA 的最大吸收波长下得到商灵敏度的测定，并且不再受
其他成分的干扰。 该方法重复性好，灵敏度高，极大地减少了样品的消耗量，降低了成本，并且还可进行各种复杂
样品(如血浆)中 LMWH 抗 FXa 活性的监测。
低分子盘肝家
关键词:体积排阻色谱;抗凝血因子 Xa
ö
中图分类号:0658 文献标识码:A 文章编号: 1000-8713 (2013) 07 -0684-07
An assay for anti-factor Xa activity of low molecular
weight heparins by high performance liquid size
exclusion chromatography
ZHANG Qianqian , KANG Jingwu
( Shanglωi InslÏ-tute oIOlganic ChemÎ,str-y , Ch仰cese Academy 01 Sciences. Shω品，gha，i 200032. China)
Abstract: The U gold standard assay for monitoring low molecular weight heparins (LMWHs)
activity is the chromogenic-based anti-factor Xa assay. The methodology of an anti-factor Xa
assay is that LMWH is added to a known amount of excess factor Xa and excess antithrombin.
It will bind to antithrombin and form a triplet complex with factor Xa , inhibiting the activ
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