加压毛细管电色谱法测定肥胖大鼠尿液中内源性代谢物.pdfVIP

第3S 卷 分析化学 (FENXI HUAXUE) 研究报告 :第8 期 21XY7年 8 月 Chinese Journa] of Analvt忧al Chemi刑凹 ll ll-lllS 加压毛细管电色谱法测定肥胖大鼠尿液中内源性代谢物 谢国祥1.2 邱明丰1 赵爱华1 李鹏t 谷雪l 贾伟. 1 ， 2 (上海交i屋大学:药学院J 系统生物医学研究院!上j每 2ω240) 摘 要 利用♀锐现F币F 自梭在乙E酣旨作为衍￡斗牛l卡毛~ ，化七tl诚式剂，建寸哎:了测~尿丰样手中内i泌掠性{代tu附时物的加l岖巨毛细管咆色i谱普7方7法。采用 毛细管色i谱普柱 EP.臼l 50δ30. /约5O小C飞1 3 ，以 0. 0创1%串 TFA 水浴溶e液(A川)与0.0ωI %TFA 的 9仍5%ζ乙a脂水浴液(惮B)组成流 动粉 时吕溃测F剧j定f正常大鼠归以{液与肥月胖宇大鼠尿液中儿种代谢物的含量。在最佳条件下，6 手中内源性代谢物在 1. 2 - 5ω mg/L 范周内线性良好，相关系数为0. 998 悔。.9999; 日间和日内精密lJ[小于 5%;二F均由日样回收率 在95. 9% 斗。3.2% 之间。 本方法用于大鼠尿液中内源、位代谢物含矮的测定，简单、灵敏、 I!f.确 。 关键词尿Ati财物， 氯甲酸乙酶， hu际毛细管也包i普 1 引言 肥胖是→种常.hl的营养障碍性疾病，肥孵是糖尿病、心血管疾病及高血压等疾病和社会心理障碍的 重要危险因素。肥胖症已被世界卫保gn织列为与癌症并列的21 世纪威胁人类健康的最严重的疾病: 1] 。 研究肥胖症及预防诊断巳成为紧迫的课题。 但是，现在对于由肥胖引起的与肥胖密切相关的体内发生 显著变化的内糠性代谢物并没有进行具体的测定。 由于机体的病理变化，机体的代谢产物也相应地j衍 生了某种变化，而与机体代谢物密切相关的就是一些小分子的氨基酸、膀类等。目前，用于测定体内小 分子的方法主要有 LC-MS[2 -~j 、CE-MS!6人GC_ MS[7.8) 、 HPLC. UF[9j 和 HPLC-ECD 方法等.: 101 。 毛细管电 色谱技术 (ωpillruy eleclfochJ:Omat咱呻峙，， CEC) 是液相色谱(.LC) 和毛细管电掠(CE) 技术的巧妙结 合。 CEC 具有 HPLC 和 CE 的政重优势:它一方面解决了 CE 选择性差、难以分离中性物质的问题，另一 方面提高了植相色谐的分离妓率[ L L : 。 加压毛细赞电色谱( pressurized capillsr) electro:hromatogtaphy , pCEC) 是将高Jf泵和进样阀引入到 CEC 中， 从而进一步拓展CEC 的优势! 1231 0 高脂饲料诱导的肥胖， 大鼠与对照组大鼠相比，体内内源陈代谢物如褪占摸索、酷氨酸、酷脏、苯芮氨酸等均发生显著地变 化r 14 . 15 1 。 本研究采用氯甲酸乙酶作为衍生化出剂，采用加压毛细管电色谱同时测定正常大鼠尿样与高 脂饲料诱导的肥胖大鼠尿样中与肥胖密切相关的儿种代谢物的含量，过~. 察力日j某毛细管电色谱对复杂体 系的分离能力。 同时，为由肥胖引起的内源性代谢物的变化提供一个简便、可靠的检测方法。 2 实验部分 2. 1 仪器与试剂 TriSep™-2100 加用毛细管也色谱仪(美国通;做技术股份有限公司， Pleasanton ,CA , USA) ，包括二元 培剂高压输液泵、正负30 kV 高压电源、微流控制系统、紫外-可见光检测器和数据处理系统; 毛细管色 谐柱(卖肉通微技术股份有限公司)。 乙腊、甲醇(HPLC 纯，M~rck 公司) ;氯甲酸乙酶(分析纯，沪试国药集团化学试剂有限公司) ;褪祟 素、印硫氨酸、尿黑酸、陆氨酸、黯脏、 苯丙氨酸及L毛氯苯丙氨酸标准品(Sigma 公司) ;无水乙草草(分析 纯，沪i式国药集团化学试剂有限公司) ; 三氟乙酸(trit1uoroacetic acid , TFA) ( HPLC 纯，DIMA 公司) ;水 为超纯水，其它试剂均为分析纯。 2现)6.10.币收稿;2ω7~5.)4 接受 本文系