非小细胞性肺癌病人相关细胞因子的表达论文.docVIP

　　非小细胞性肺癌病人相关细胞因子的表达论文 【摘要】 目的 探讨非小细胞性肺癌（NSCLC）病人局部微环境中免疫反应特点及其对抗肿瘤免疫的影响。方法 以5例结核性胸膜炎病人作为对照,采用地高辛末端标记的寡核苷酸探针,以原位杂交技术检测了23例NSCLC病人的新鲜胸腔积液和(或)手术切除标本淋巴细胞和肿瘤细胞中IL-2、INF-γ、IL-4、IL-10、TGF-β1、IL-1、IL-3、IL-8、GM-CSF、TNF-α及TGF-α mRNA的表达。结果 病人胸腔积液的单个核细胞及肿瘤组织中, IL-4、IL-10、TGF-α和TGF-β1 mRNA的表达水平明显高于IL-2、IL-12、IL-18、INF-γ；而结核性胸腔积液的单个核细胞中上述细胞因子的水平均降低,并且各细胞因子的表达水平之间没有明显的差异。结论 NSCLC病人胸腔积液的单个核细胞及肿瘤组织中,Ⅱ型细胞因子和免疫抑制细胞因子mRNA的表达占主导地位,反映了肿瘤局部的免疫微环境处于抑制状态。上述结果有助于了解肿瘤逃逸的机制,并为制定NSCLC免疫治疗的方案提供了重要的实验依据。 【关键词】 癌 非小细胞肺 细胞因子类 原位杂交 ［ABSTRACT］ObjectiveTo explore the characteristics of immune responses in the microenvironment of non-small cell lung cancer (NSCLC). MethodsIn situ hybridization (ISH) RNA expressions of cytokines in fresh pleural effusion samples and tumor tissue samples of 23 NSCLC patients. Five tuberculous pleurisy patients served as controls. ResultsThe mRNA expression of IL-4, IL-10, TGF-α and TGF-β1 in tumor tissue and mononuclear cells from pleural effusion of NSCLC patients RNA expression of IL-4,.freelples RNA expression among different samples of tuberculous pleurisy patients.ConclusionThe mRNA expressions of type Ⅱ cytokines and immunosuppressive cytokines predominated in the pleural effusion and tumor tissue of NSCLC patients, suggesting an immunosuppressive microenvironment around the tumor. The results contribute to a better understanding of the mechanisms of tumor escape and provide an important experimental basis for e for an effective immunomodulatory treatment of NSCLC patients. ［KEY -CSF：5′-CAAACATTTCTGAGATGACTTCTACTG-3′；TNF-α：5′-AACTTTATTTCTCGCCACTGAATAGTA-3′。将13种细胞因子分为5组:IL-2、IFN-γ、IL-12和IL-18为Th1型细胞因子；IL-4和IL-10为Th2型细胞因子；TGF-β1为免疫抑制细胞因子；IL-1、IL-3、IL-8为致炎细胞因子的代表；TGF-α、TNF-α和GM-CSF。采用地高辛(DIG)寡核苷酸末端标记试剂盒标记探针,标记过程严格按照产品说明书进行，标记的探针活性为1.56 nmol/L。 1.2.2 细胞因子的原位杂交 细胞涂片和组织石蜡切片的制备：整个操作过程均在无酶的环境中按常规操作进行。组织切片经脱蜡、消化和固定,并经梯度乙醇脱水后，室温干燥，于42 ℃先加预杂交液10~30 mL在盒内预杂交2 h，然后加杂交液10~30 μL，在42 ℃杂交22 h。以梯度标准枸橼酸盐水(SSC)充分洗涤后，加抗体于37 ℃作用2 h，再以NBT-BCIP显色18 h。用Buffer Ⅲ作用5 min终止显色反应.freelin，