蒸发光散射检测器hplc法测定大豆低聚糖.pdfVIP

第23卷第4期 应用化学 V01．23No．4 CHINESE OFAPPLIEDCHEMISTRY 2006年4月 JOURNAL Apr．2006 蒸发光散射检测器HPLC法测定大豆低聚糖 夏海涛+ 刘玉芬 陈红卫 (长春工业大学生物工程学院长春) (淮海工学院化学工程系连云港222005) 摘要用高效液相色谱法，以乙腈．水为流动相，梯度洗脱程序和蒸发光散射检测器对大豆低聚糖进行分 析，在20min内将大豆低聚糖中的主要成分蔗糖、棉籽糖和水苏糖与其它组分完全分离。用外标法对3种主 要成分进行定量，线性关系良好。回收率为96．5％一99．1％，相对标准偏差为0．18％～4．67％。该法操作简 便，分析速度快，可作为常规检测方法应用。 关键词HPLC，ELS检测器，梯度洗脱，低聚糖，大豆 中图分类号：0658．1 文献标识码：A 文章编号：1000-0518(2006)04-0462-03 大豆低聚糖是大豆中可溶性糖质的总称，其成分是聚合度为2—4的糖组分，主要由蔗糖(二糖)、 棉籽糖(三糖，又称密三糖)和水苏糖(四糖)组成。大豆低聚糖甜味纯正，保湿及吸湿性优于果葡糖浆， 且水分活性近于蔗糖，具有多方面的保健功能¨，2J。大豆低聚糖的测定方法有纸色谱法、薄层色谱法、气 相色谱法和高效液相色谱法∞。J。纸色谱法和薄层色谱法分辨率低，分析时间长，定量测定困难；气相 色谱法需将样品制备成易挥发、热稳定的衍生物后才能测定；传统的电泳法和上世纪80年代后期迅速 发展起来的高效毛细管电泳法能进行糖的分离∞7J，但检测灵敏度低，再现性相对较差。目前，国内报道 的高效液相色谱法基本采用折光检测器检测。由于折光检测器对温度、流动相组成变化敏感，所以无法 NH：色谱柱，乙腈一水为流动相，蒸发光散射检测器检 采用梯度洗脱，分析时间较长。本文采用Hypersil 测，建立了大豆低聚糖的高效液相色谱梯度洗脱方法，克服了折光检测器的不足，缩短了分析时间，结果 令人满意。 cmX4．6mm 402型数据处理机；HypersilNH：色谱柱(大连依利特科学仪器有限公司)，5Ixm，30 i．d；流 min为体积分数 动相采用梯度洗脱，A为乙腈，B为水。起始流动相体积分数为80％A，线性递增至15 min。以1．0 x 50％A，维持5 mL／min流速进样20止。蒸发光散射检测器温度80℃，空气压力2．1 105 Pa。 乙腈、甲醇为色谱纯试剂；果糖、葡萄糖、蔗糖为标准品；棉籽糖为标准品(Fluka进口分装)；水苏糖 为标准品(美国Sigma公司)；二次蒸馏水；无水乙醇为分析纯试剂；大豆低聚糖样品(齐齐哈尔大学生 命科学院)。 分别准确称取一定量蔗糖、棉籽糖和水苏糖标准品，用体积分数为80％乙醇溶解，分别定量转移至 50 mL容量瓶中，稀释至刻度，作为标准贮备液，用时稀释成系列标准混合溶液。 mL，充分混合。水浴70℃加热回 参照文献[5]方法，准确称取大豆饼粕10g，加80％乙醇溶液100 000 流1h，用高速离心机(10 r／min)离心分离10min，沉淀用体积分数为80％乙醇重复提取3次，合并 上清液。加入饱和醋酸铅溶液10mL，0．5mol／L草酸溶液10mL，离心分离，沉淀用体积分数为80％乙 醇洗涤3次。收集上清液，用NaOH溶液中和后浓缩至约60m