高压氧对弥漫性脑损伤大鼠组织病理学的影响论文.docVIP

　　高压氧对弥漫性脑损伤大鼠组织病理学的影响论文 王伯良，曹义战，晋兴，仲月霞，李金声，陆将，何保健,付国强 【关键词】 脑损伤 【Abstract】 AIM: To investigate the effect of hyperbaric oxygen on diffuse injured rats brain histopathology. METHODS: Pa hyperbaric oxygen on brain injury e after trauma（6 h, 1 d, 2 d, 3 d, 1 ent（NF）a using immunohistochemistry methods. The content of easured by dried/ethod. RESULTS: After trauma, diffuse neuronal degeneration and necrosis ber of damaged neurons and the brain a and axonal injury occur after trauma and HBO treatment may decrease the damaged neurons and alleviate brain edema. 【Keyarou介绍的落体打击装置制作弥漫性脑损伤大鼠模型，观察大鼠脑外伤后6 h.freelarou等［1］介绍的动物损伤方法制作弥漫性脑损伤（diffuse brain injury，DBI）模型.用质量为450 g的物体，从150 cm高度自由落下打击大鼠头部致伤.打击前用速眠新合剂腹腔麻醉，将大鼠置于厚海绵床上，用牙胶将一块直径10 mm、厚3 mm的钢板固定在大鼠的颅骨穹隆部，使大鼠头部在打击后沿外力作用向前运动并避免颅脑局限性损伤. 1.3 高压氧治疗 大鼠致伤3 h后，使用DPa min-1的加压速率，用15 min加压至0.2 MPa，在高压下停留60 min，其间用纯氧通风10 min.停留毕，20 min减至常压，每次共113 min，每日1～2次（第1周内2次 d-1，之后1次 d-1），每周休息1 d.损伤组动物亦置于舱内，模拟除压力、氧浓度外的类同实验组的其他过程和环境条件.实验过程中，通过观察窗仔细观察动物在舱内的行为状态.舱内温度18～24℃. 1.4 各组动物处理 采用Marmarou［1］等介绍的动物损伤方法制作弥漫性脑损伤模型. 治疗组大鼠给予高压氧治疗，在动物致伤6 h，1 d，2 d，3 d，1 g kg-1）腹腔麻醉，开胸暴露心脏，插管，由左心室经主动脉快速灌注生理盐水200 mL， 40 mL L-1多聚甲醛-0.1 mol L-1PBS液400 mL，断头取脑，再置于多聚甲醛中浸泡6 h，根据大鼠脑定位图谱选取冠状切面（Bregma 4.16 mm）皮层、海马、下丘脑平面，按常规制成厚约5 μm石蜡切片，并行HE染色.石蜡切片常规脱蜡至水后，对抗原进行修复（切片置于pH 6.0，001 mol L-1柠檬酸柠檬酸盐缓冲液于水浴锅中95℃ 30 min行热修复），自然冷却，001 mol L-1KPBS洗涤，分别加入一抗NF（13000）6 h、二抗IgG（1300）2 h、ABC（1500）2 h（一抗、二抗及ABC均购自武汉博士德公司，一抗用3 g L-1Triton X100处理的小牛血清稀释，二抗、三抗用KPBS稀释），DAB棕色显色，蒸馏水终止反应，水洗，常规脱水透明，中性树脂封固，KPBS代替一抗作阴性对照. 1.5 脑组织含水量测定 大鼠断头后快速取金属垫下顶部皮层脑组织一块，先称湿重，放入110℃烘箱烘烤24 h后再测干重.按公式计算脑组织含水量： 脑组织含水量（%）=〔（湿重－干重）/湿重〕×100% 1.6 变性坏死神经元计数 神经元损伤主要表现为神经元肿胀或皱缩，核仁消失，核膜溶解，胞质强烈嗜伊红性和胞核固缩.核酸进一步溶解消失，苏木素着色力丧失，表现为“鬼细胞”（gost cell）［2］.在海马与齿状回互包平面将脑组织的顶叶皮层、海马2个区，分别观察5个高倍镜视野（×400）记数变性坏死神经元数目.计算求得平均各区变性坏死神经元数目，以number/field表示. 统计学处理：细胞记数采用SPSS100软件作方差分析. 2 结果 2.1 动物行为 受打击的动物，伤后即刻出现呼吸暂停数秒，16只动物出现持续数秒的轻度全身抽搐（损伤组7只，治疗组9只），有的伴有去皮层综合征（表现为双侧前肢屈曲，双侧后肢强直，颈项强直等）.经辅助呼吸后多数可恢复规则的自主呼吸.与正常对照动物相比，麻醉恢复要迟十几分钟至半小时.各组动物在