乙肝五项、梅毒的检测及应用精减.ppt

孕前优生健康检查临床检验操作技术培训 河南省人口和计划生育科学技术研究院 免疫层析快速检测技术 历史： 放射免疫测定 1960 酶免疫测定 1970 荧光免疫测定 1980-1990 化学发光免疫测定 1990 膜固相免疫测定 1990 原理 将特异的抗原（或抗体）先固定于固相膜的某一区带，当该干燥的固相膜一端浸入样品后，由于毛细管作用，样品将沿着该膜向前移动，当移动至固定有经过标记的抗体区域时，样品中相应的抗原即与该标记抗体发生特异性结合，抗原抗体复合物移动到特定区域被捕获，使该区域显示一定的颜色，从而实现特异性的免疫诊断。 特点： 快速 简便 可单份检测 稳定性好 检测种类多 可测定物质范围广 不足之处 敏感度略低，价格略高（与ELISA比） 不易制备定量、半定量试剂 质量控制困难 免疫层析快速检测试剂结构图 免疫层析快速检测常用的结合物 胶体金 乳胶颗粒 胶体金 也称金溶胶，是由金盐还原形成的金颗粒悬液。 由一个基础金核及包围在外的离子层构成。呈球形（小颗粒）或椭圆形（大颗粒）。 对电解质敏感，对试验有影响。 呈色性：胶体金的光散射性与溶胶颗粒的大小密切相关，一旦颗粒大小发生变化，光散射也随之发生变异，产生肉眼可见的显著的颜色变化。 固相膜种类 玻璃纤维素膜 尼龙膜 聚偏氟乙稀膜 硝酸纤维素膜 固相NC膜 固相膜特点 多孔性 毛细管作用 非共价键高度吸附 高度敏感性 抗原或抗体 易于漂洗 操作简便 免疫层析快速检测技术分类 双抗体夹心法测抗原 间接法测抗体 双抗原夹心法测抗体 竞争法测抗体 操作步骤 试剂盒先恢复室温，从原包装铝箔袋中取出试剂盒，在1小时内尽快地使用。 将试剂盒置于干净平坦的台面上，用塑料吸管垂直滴加3滴（100微升）无气泡的血清/血浆于试剂盒的加样孔内。 等待紫红色条带的出现，测试结果应在15分钟内读取。20分钟后判断无效。 结果判断 夹心法 结果判断 竞争法 结果判断 质量控制 应避免样品溶血。溶血、粘稠及高脂标本可能会导致检测结果不稳定。 实验环境应保持一定温度，避风。避免在过高温度下进行实验。 试剂从包装中取出后，应尽快进行实验，避免放置于空气中过长时间，导致受潮。 试剂若为室温应注意防潮；若低温下保存应平衡至室温方可使用。 滴加试剂时，应先摇匀，并弃去1~2滴，垂直滴加。 此方法为初筛，因此阳性结果须用其他方法（如EIA）进一步确认。 乙肝五项的检测及应用 1.乙肝五项的各项简述 2.乙肝五项各项的临床意义 3.乙肝五项32种可能组合 4.乙肝五项检测的影响因素 5.乙肝五项检测标准化操作 乙肝五项 乙肝病毒表面抗原（HBsAg） 乙肝病毒表面抗体（抗-HBs） 乙肝病毒e抗原（HBeAg） 乙肝病毒e抗体（抗-HBe） 乙肝病毒核心抗体（抗-HBc） 乙肝五项的各项简述 1．HBsAg血清中检出HBsAg是乙型肝炎的早期诊断指标之一，出现于患者血清转氨酶(ALT)升高前2—8周，至恢复期HBsAg滴度逐步降低乃至消失，抗HBs出现。有部分患者HBsAg在血清中可持续存在,是因肝细胞仍在不断地复制HBsAg。???????? HBV感染后绝大多数感染者外周血中可出现HBsAg. 但有少部分HBV感染者血清HBsAg测定为阴性，如暴发性乙型肝炎。急性重症乙型肝炎，肝细胞中以合成HBcAg为主，很少或不合成HBsAg，从而使外周血中无HBsAg。 ???????? 目前国内最常用的HBsAg免疫测定方法为酶联免疫吸附试验(ELISA)，其次是放射免疫试验(RIA)。 ? 2．抗HBs????????当乙型肝炎病毒侵入人体后，刺激人的免疫系统产生免疫反应，这种特异的免疫球蛋白G，