GBT 7650-1987 谷物籽粒色氨酸测定法.pdfVIP

中华人 民共和 国国家标准 UDC 633.1-543-06 谷物籽粒色氨酸测定法 GB7650一 87 Determinationoftryptophanincerealgrains 适用范围 本标准适用于测定谷物籽粒色氨酸含量。 原理 谷物蛋白质碱解后，降解成肤和游离的氨基酸。在酸性介质中，有硝酸盐存在条件下，色氨酸叫噪 环与对二甲胺基苯甲醛反应，生成蓝色化合物，在一定范围内颜色深浅与色氨酸含量成正比。 3 仪器、设备 3 . 1 分析夭平，感量。.1mg, 2 3 . 实验室用粉碎机。 3 5 . 721型分光光度计，或相当的仪器。 4 3 . 离心机，4000r/min, 3 5 . 培养箱。 3.6 20ml具塞刻度玻璃试管(须校准). 4 试剂 除注明者外均为分析纯。水为蒸馏水。 4.1 浓盐酸(GB622-77)，比重1.19, 4.2 10%盐酸溶液:22.7ml浓盐酸加水至IOOMI, 4.3 5%对二甲胺基苯甲醛 (HGB3486-62)溶液:5g对二甲胺基苯甲醛溶于10外盐酸中，并定容 100m1, 4.4 1写硝酸钠(GB636-77)水溶液(m/V), 注:咯℃冰箱中保存，一周内使用有效。 4.5 10%氢氧化钾(GB2306-80)水溶液(m/V), 4.6 L一色氨酸，层析纯. 4.7 L一色氨酸标准溶液:准确称25mgL一色氨酸 (105C干操2h)，加少量0.Imol/L氢氧化钠 (GB 629-91)使之溶解，定tI地转移到250m!棕色容量瓶中，用水定容。浓度为100ug/mi, 注:4℃冰箱中保存，一个月内使用有效. 5 试样的选取与制备 5.1选取具有代表性谷物籽粒，挑拣干净，按四分法缩减取样，样量不得少于20g。籽粒充分风干后 用粉碎机磨碎(带壳籽粒先脱壳)，使95 以上通过。.25mm孔径筛。 6.2 按GB2906-82谷《类、油料作物种子粗脂肪测定法》脱脂并测定脂肪含量。脱脂样品风千后 · 混匀，装入磨口瓶中备用. 中华人民共和国农牧渔业部1987一03一26批准 1987一11一15实施 GB 7650一 87 6 校准曲线的绘制 吸L一色氨酸标准溶液0.2,0.3,0.4,0.5,0.6,0.7ml分别置于20ml具塞刻度玻璃试管中，加 lml 10%氢氧化钾溶液，摇匀;加0.2ml5%对二甲胺基苯甲醛，摇匀;加 。.2ml1%硝酸钠，摇匀;将试管置 于冰水中，再加5ml浓盐酸。取出试管，强烈振摇后放入25℃培养箱中显色75min温度升到25℃时记 时)，取出后用水稀释至刻度，摇匀。以试剂空白作对照在590nm波长处测读吸光度。以色氨酸含量 (118)为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制校准曲线。在温度较高的季节和地区，制定校准曲线时，参见附录 Ae 7 测定步驻 7.1 称样:称取40mg试样两份，准确至0.lmg，与此同时，另称样品，按GB3523-83《谷类、油料作 物种子水分测定法》测定水分含量。 7.2 水解:将试样置于20ml具塞刻度玻璃试管中，加lml10%氢氧化钾，振摇，祥品全部湿润后，放 入40℃培养箱中水解 16-18h. 7.3 显色:从培养箱中取出试管冷至室温后加0.2ml5%对二甲胺基苯甲醛，摇匀。加0.2ml1%硝 酸钠，摇匀;将试管置于冰水中，再加5m1浓盐酸。取出试管，强烈振摇后置于40℃培养箱中显色45min (温度升到40℃时记时)。 7.4 测定:取出试管冷至室温后，用水稀释至刻度，摇匀。以4000r/min离心lOmin。取上清液以试 剂空白作对照，在590nm波长处测读吸光度。 8 结果计算 8.1 计算公式 aX 10 色氨酸，%①(干基)二 义 100 m(1一H) 式中