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产品使用说明书产品使用说明书 产品使用说明书产品使用说明书 Protein Refolding KitProtein Refolding Kit PProtein Refolding Kitrotein Refolding Kit 内容提要内容提要 内容提要内容提要 一、一、 关于试剂盒关于试剂盒 一一、、 关于试剂盒关于试剂盒 • 试剂盒描述 • 试剂盒组分 二、二、 蛋白包涵体制备蛋白包涵体制备 二二、、 蛋白包涵体制备蛋白包涵体制备 三、三、 溶解于重折叠溶解于重折叠 三三、、 溶解于重折叠溶解于重折叠 • 蛋白重折叠透析操作步骤 促进二硫键形成的氧化还原重折叠缓冲液 • 阳离子交换柱去除 N-十二烷基肌胺酸钠 • 浊度法检测 N-十二烷基肌胺酸钠 四、四、 附录附录AA ：蛋白重折叠附加资料：蛋白重折叠附加资料 四四、、 附录附录AA ：：蛋白重折叠附加资料蛋白重折叠附加资料 • 蛋白重折叠方法 • 影响蛋白重折叠条件的的蛋白特性 二硫键 疏水性与聚集 辅基 静电作用 • 重折叠缓冲液添加剂 默克生命科学服务热线默克生命科学服务热线：：400 820 8872 默克生命科学服务热线默克生命科学服务热线：： bioteam@ 关于试剂盒关于试剂盒 关于试剂盒关于试剂盒 蛋白重折叠试剂盒 70123-3 描述描述 描述描述 蛋白重折叠试剂盒提供了重溶大肠杆菌表达的包涵体蛋白时所有可能用到的试剂，这些试剂与 随盒附送的简明操作流程使得分离的包涵体能够在温和的变性条件下重溶。蛋白重溶后，将可 溶部分用含有还原试剂的中性缓冲液透析促进二硫键正确折叠，多余的还原剂可以再次用透析 除去并将中性缓冲液替换成所需蛋白缓冲液。经验证，这个操作流程适用于从包涵体中重溶得 到的CBD•TagTM融合蛋白及其他重组蛋白的重折叠。 蛋白重折叠试剂盒中提供的组分都经Novagen验证成功适用于一系列融合蛋白的重折叠，包括 细菌碱性磷酸酶，β-半乳糖苷酶，绿色荧光蛋白，β-葡萄糖苷酶和CBD•Tag亚区。 组分组分 组分组分 试剂盒提供了足够处理2g包涵体的试剂 • 100ml 10×IB Wash Buffer（200mM Tris-HCl, pH7.5, 100mM EDTA, 10% Triton X-100） • 50ml 10×IB Solubilization Buffer（500mM CAPS, pH 11.0 ） • 10ml 30% N-lauroylsarcosine • 200ml 50×Dialysis Buffer（1M Tris-HCl, pH 8.5 ） • 3.2ml 1M DTT 包涵体制备包涵体制备 包涵体制备包涵体制备 此操作流程从诱导细胞表达重组蛋白开始，比如使用pET系统。重组载体构建与细菌生长诱导 参数优化操作详见pET系统用户手册——TB055，用户可以向Novagen 申请或登录 网站下载电子版。 离心从细胞粗提物中分离包涵体，用1×IB Wash Buffer清洗两遍去除松散结合的污染物。需要 准备大约0.5倍培养基体积的1×IB Wash Buffer备用。 1. 4℃，6,500×g离心15分钟收获诱导后的培养基，去除上清。 2. 用0.1倍培养基体积的1×IB Wash Buffer （20mM Tris-HCl, pH7.5, 10mM EDTA, 1% Triton X-100 ）。充分混合均匀。 3. 将细菌重悬液冷却到4℃阻止细胞裂解过程中产热。可采用下面两种操作方法。两种最常用 的裂解大肠杆菌