诊断芯片的检测对象是基因.ppt

生物芯片的制备技术研究 生物芯片的制备技术研究 一、 绪 论 生物芯片的基本概念 生物芯片的分类 几种生物芯片的有关进展 三、 基因芯片的制备与检测技术研究 基因芯片概述 基因芯片概述 基因芯片图解 基因芯 片图解 基因芯片微阵列的构建 基因芯片微阵列的构建 样品制备与杂交反应 四、肝炎诊断基因芯片的制备及性能研究 五、蛋白质芯片的构建及性能研究 六、生物芯片实用化的若干问题及其应用前景分析 肝炎诊断基因芯片的制备与应用实验 探针DNA的准备 目的DNA的选择（HAV、HBV、HCV、HDV特异性DNA片断） PCR扩增 点样以前，要将PCR产物清洗纯化干净，并且对DNA进行一些处理，一般用异丙醇沉淀PCR产物，以除去酶、离子及核苷酸等。 载物片的选择与处理 载物片是要将DNA点上去的支撑物，可用作基因芯片基底材料有硅片、玻片、硝酸纤维膜、陶瓷片、尼龙膜等，一般被动式生物芯片常用载玻片。DNA并不能直接固定在玻璃表面，因此需要对玻璃表面进行处理。 肝炎诊断基因芯片的制备与应用实验 点样 点样设备为美国CARTESIAN TECHNOLOGIES 制造的ProSysTM PA Workstation全自动针阵点样系统，高精度X-Y-Z样品平台，移动精度达到10微米 点样的质量主要表现在点与点的距离，这取决于点样吸头的尖锐度与多聚-L-赖氨酸涂面的疏水性 点样后加工处理 当一个基因芯片点成之后，需要对其进行进一步的加工处理，以便能够用于以后的杂交实验。通常进行四步处理，即重新水合化及快速干燥、UV-交联、封闭和变性 肝炎诊断基因芯片的制备与应用实验 待测样品制备、标记 和实验对照设计 从样品中提取RNA（或cDNA）、在PCR扩增的时候加上标记 异种RNA平行实验 RNA质量检测对照 封闭对照 归整化对照 杂交和杂交后处理 注意杂交的温度和湿度、清洗 肝炎诊断基因芯片的制备与应用实验 荧光扫描分析 美国GSI Lumonics公司出品新一代激光共聚焦生物芯片扫描系统ScanArray 4000 、一套系统，包括配套分析处理图象软件 肝炎诊断基因芯片的制备与应用实验 传统检测方法与基因芯片检测方法比较 ? 传统ELISA ? PCR+ ELISA ? 基因芯片 检测对象 蛋白 基因 基因 免疫反应 需免疫应答反应 无需 无需 检测品种 单一检测 单一检测 同时多项检测 检测原理 抗原-抗体反应 PCR+杂交+抗原-抗体反应 杂交(或加PCR) 检测效果 有一定漏检率 准确、可靠 准确、可靠、灵敏 检测特点 显色反应 操作复杂 显色反应 操作更复杂 由荧光扫描仪检测 计算机自动分析 成 本 中 高 低 方法 项目 基因芯片实验中的常见问题 点印点的形态不规则（拖尾 、小空洞） 强背景信号（导致图像模糊不清） 局部信号偏弱 基因芯片只能检测到人体各种遗传信息在DNA/RNA水平的变化，而无法检测出在蛋白质水平上的变化。同时基因芯片的制作和检测费时，所需探针必须人工合成，必须经PCR扩增过程，还要进行昂贵的荧光标记。随着人类基因组计划测序工作的完成，下一步将要进入更加复杂的蛋白质功能的研究，迫切需要蛋白质芯片技术 。 蛋白质芯片概述 蛋白质芯片构建的技术平台研究 蛋白质芯片的初步构建 在疾病诊断中蛋白质芯片和DNA芯片的比较 蛋白质芯片概述 在DNA上的遗传信息绝大部分编码的是蛋白质的氨基酸排列顺序，它们最终需要表达成蛋白质才能起作用。蛋白质是生物表现千差万别的功能的基本物质。 基因组序列的信息是由蛋白表达才行使其功能的，进而使生命能够正常进行。 蛋白质芯片是利用抗体与抗原结合的特异性即免疫反应来检测。 蛋白质芯片概述 蛋白质芯片构建的简化模型为：选择一种固相载体能够牢固地结合蛋白质分子（抗原或抗体），这样形成蛋白质的微阵列，即蛋白质芯片。如果加入与之特异性反应的带有特殊标记的蛋白质分子（抗体或抗原），两者结合后，通过对标记物的检测来实现抗原抗体的互检，即蛋白质的检测。 蛋白质芯片以蛋白质代替DNA作为检测目的物，比基因芯片更进一步的接近生命活动的物质层面，因而有着比基因芯片更加直接的应用前景。 蛋白质芯片构建的技术平台研究 蛋白质方阵要解决的问题： 一是要保持蛋白的活性(点样溶液中加入40%甘油以防止蛋白变性) 二是要保证蛋白质正确定位(在膜表面覆盖一层与氨基反应的试剂，蛋白质的氨基末端或赖氨酸残基就会与此试剂交联反应而固定于膜