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様式3 学 位 論 文 要 旨 研究題目 Knocking‐in the R142C mutation in transglutaminase 1 disrupts the stratum    corneum barrier and postnatal survival of mice （トランスグルタミナーゼ1 にR142C変異をノックインしたマウス では角層バリアと生後の生存が障害される） 兵庫医科大学大学院医学研究科 先端医学専攻 分子病態制御系 皮膚病態制御学（指導教授 山西清文 ） 氏 名 中川 登 研究目的：トランスグルタミナーゼ（TG）は、タンパクのグルタミン残基とリシン残 基の間に架橋結合反応を触媒する酵素で、タンパク間の共有結合形成を介して、生体 の種々な機能に関わっている。ＴＧアイソザイムのなかで、トランスグルタミナーゼ １（TG１）は表皮の顆粒層で発現し、細胞膜に移行してロリクリンなどのタンパクを 重合し、角層細胞辺縁に強固な周辺帯（コーニファイドエンベロープ）（ＣＥ）を形成 するために必須の酵素である。また、ＴＧ１をコードする遺伝子ＴＧＭ１の変異は常 染色体劣性魚鱗癬の発症に関わり、とりわけＲ１４３Ｃ変異は、重症の葉状魚鱗癬の 表現型を示すことが報告されている。本研究では、TG１のＲ１４３Ｃ変異に相当する 変異Ｒ１４２Ｃを持つマウスを作出し、このTG１変異が皮膚のバリア構造・機能に及 ぼす影響を調べた。 研究方法： 129/SVJ マウスＴＧ１遺伝子(Tgm1)の exon 3 に存在するアルギニンをコ ードするCGTをシステインをコードするTGTに置換した配列と、loxPを両側に持つネ オマイシン耐性遺伝子(neo)を intron 3 にもつターゲティングベクターを構築し、ES 細胞に導入後G418共存下で培養し、相同組換えを起こしたクローンを選別した。この ES細胞を集合キメラ法により胚盤胞期まで培養し、偽妊娠マウスに移植してキメラマ ウスを作成した。雄キメラを雌C57BL/6 と交配し、この変異とneo 遺伝子をもつマウ ス Tgm1+/R142CfloxNeo を樹立後、CAG-cre トランスジェニックマウスと交配して neo を除 き、R142C 変異をヘテロに持つ Tgm1+/R142C を樹立した。 結果：Tgm1+/R142C マウス同士を交配し、R142C 変異をホモに持つ Tgm1 R142C /R142C を作 成した。Tgm1 R142C /R142C は生育せず、生後数時間程度で死亡した。出生直前の 19.5 dpc の変異マウス皮膚において、定量的 RT-PCR では Tgm1 の発現は野生型、Tgm1+/R142C と同程度であったが、TG1 タンパクの発現量は著しく低下していた。培養表皮角化細 胞における TG1 活性も細胞質、細胞膜ともに Tgm1 R142C /R142C では野生型に比して著し く低かった。Tgm1 R142C /R142C のHE 染色像では顆粒層の肥厚がみられ、TG1 抗体を用 いた蛍光抗体法では TG1 の発現低下、in situ TG アッセイでも顆粒層細胞辺縁における TG 活性の低下が観察された。基質となるロリクリンは野生型では細胞辺縁に局在する が、Tgm1 R142C /R142C では細胞内に顆粒状に局在した。電顕では Tgm1 R142C /R142C において 角層の著しい肥厚と周辺帯の形成不全、角層細胞内に異常な顆粒の存在、不規則な角 層細胞間層板構造、ＣＥに架橋するリピッドエンベロープ（ＣＬＥ）の形成不全が観 察された。角層バリア機能に関して、Tgm1 R142C /R142C ではＣＥは壊れやすく、トルイジ ンブルーの皮膚透過性が亢進し、経表皮水分蒸散量（ＴＥＷＬ）が著しく増加してい た。生きた 19.5 dpc マウスの角層細胞間脂質の分子配向