第七章发酵染菌与防治.pptVIP

1. 染菌的检查与判断 显微镜检查法 镜检出杂菌需要一定时间 平板划线培养或斜面培养检查法：菌落 噬菌体检查可采用双层平板法：噬菌斑 肉汤培养检查法 发酵过程的异常现象判断 DO2水平异常变化 pH异常变化 尾气CO2异常变化 1 2 2. 污染原因分析 主要原因： ①?种子带菌 ② 无菌空气带菌 ③ 设备渗漏 ④ 灭菌不彻底 ⑤操作失误 ⑥技术管理不善 ? 从污染时间看：早期污染可能与①②④⑤→接种操作不当有关；后期污染可能与③⑤及中间补料有关。 从杂菌种类看： 耐热芽孢杆菌：与④有关 球菌、无芽孢杆菌：与① ② ③⑤有关 浅绿色菌落的杂菌：与水有关，即冷却盘管渗漏 霉菌：与④⑤有关，即无菌室灭菌不彻底或操作问题 酵母菌：糖液灭菌不彻底或放置时间较长 从染菌幅度看：各个发酵罐或多数发酵罐染菌，且所污染的是同一种杂菌，一般是空气系统问题，若个别罐连续染菌，一般是设备问题。 2. 污染原因分析 2、生物农药生产中的染菌问题 生物农药定义：又称生物源农药，指直接利用自然界有益的生物从某些生物中制取的具有杀虫、防病等作用的生物活性物质 两类：一类是活体生物农药，另一类是代谢产物生物农药 生物农药发酵生产包括：苏云金芽胞杆菌发酵、白僵菌等发酵 生产中要注意的问题：保持菌种优良的性状，定期检查无菌空气制备系统，严格菌种移接的程序，发酵过程中控制罐压及泡沫状况，防止染菌。 3. 预防 种子带菌的防治 灭菌彻底 接种可靠：无菌室及设备可靠，无菌操作可靠 保藏可靠 过滤空气带菌的防治 设备的渗漏或“死角”造成的染菌及其防治 “死角” 发酵罐的“死角” 法兰、内衬、接口、表头、罐内部件及其支撑件如搅拌轴拉杆、联轴器、冷却盘管、挡板、空气分布管及其支撑件 口：人孔（或手孔）、排风管接口、灯孔、视镜口、进料管口 发酵罐罐底脓疱状积垢造成“死角” 消除方法：加强清洗并定期铲除污垢；安装放汽边阀 管道安装不当或配置不合理形成的“死角” 发酵罐罐底脓疱状积垢造成“死角” 法兰连接不当造成的“死角” 灭菌时蒸汽不易通达的“死角”及其消除方法 培养基与设备灭菌不彻底的防治 原料性状：大颗粒的原料过筛除去。 实罐灭菌时要充分排除罐内冷空气。 灭菌过程中产生的泡沫造成染菌：添加消泡剂 防止泡沫升顶 连消不彻底 ：最好采用自动控制装置 灭菌后期罐压骤变 死角 操作不当造成染菌 噬菌体染菌及其防治 3. 预防 采取哪些措施能够保持无菌发酵？ 物料、培养基、中间补料要灭菌； 发酵设备及辅助设备（空气过滤装置、各种发酵罐进出口连接装置）和管道要灭菌； 好气发酵通入的空气要除菌； 种子无污染；接种无菌操作过关； 为了保持发酵的长期无菌状态，需维持正压。 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，我们能提高文学鉴赏水平， 培养文学情趣； 通过阅读报刊，我们能增长见识，扩大自己的知识面。 有许多书籍还能培养我们的道德情操， 给我们巨大的精神力量， 鼓舞我们前进。 * 防止发酵生产中杂菌污染有着重要的意义：1、保证发酵产品的质量、收率的温度2、保持发酵生产正常有序的进行3、有利于节约型社会的建立 一、发酵异常现象及染菌分析 （一）种子培养基和发酵的异常现象 1、种子培养基异常 出现菌体生长缓慢的原因是：1、种子自身的原因，菌种使用时间过 长，传代频繁、菌体老化及接种量少2、培养基的原因：批次间原料成分波动大。种子培养基营养缺乏3、操作过程中的原因，培养基灭菌不彻底、供氧不足等原因 出现菌丝结团的原因是：通气不足、溶氧条件差、搅拌的剪切力力过大、培养基质量下降等原因 出现代谢不正常的原因是：培养环境差、接种量少、杂菌污染等原因 2、发酵异常 1、菌体生长差2、PH异常3、溶解氧水平异常4、泡沫过多5、菌体浓度过高或过低 （二）染菌隐患检查 发酵过程是否染菌应以无菌试验的结果为依据。无菌试验方法主要有：显微镜检查法、肉汤培养法、平板培养法、发酵过程中的异常观察法。 （三）发酵染菌原因 总结为发酵工艺流程中的各环节漏洞和发酵过程中管理不善两方面。 各环节漏洞包括：1、培养基灭菌不彻底2、无菌空气带菌3、种子带菌4、消泡剂带菌5、工艺用水带菌6、管道及附属设备或罐体出现渗漏或死角7、泡沫逃溢8、批次发酵后清洗不彻底等 发酵过程中管理不善：1、工人的培训不到位导致操作上的认识2、