3种花卉基固组DNA的提取及转基因成分的PCR检测.pdfVIP

2002 年 检验检疫科学 第 12 卷第3 期 3 种花卉基因组 DNA 的提取及转基因成分的 PCR 检测 邵碧英糠 陈文炳李寿击各米晓南 李世成 (福建检验检疫局) (厦门北大之路生物工程有限公司) 摘 要 采用 CTA日微最法和试剂愈提取菊花、矮牵 XmnI 购自 Promega 公司，Nsi I 购自华类生物工程 牛、非洲菊 3 种花卉的基因组 DN人，试剂盒提取的效果较好。 公司。 100bp ladder DNA Marker 购自上悔生工生物 设计合成了 3 对引物，分别扩增花椰菜花叶病毒(Cauliflower 工程有限公坷。 mosaic virus ,CaMV) 35S 启动子、根癌农杆菌脑脂碱合成酶 2. 1. 3 号|物: 35S-1 为 5-GC丁 CC丁 ACA AAT 基因终止子(NOS! )、大肠杆菌 K12 菌株新霉素磷酸转移酶II GCC ATC A… 3 ， 35S …2 为 5 一GAT AGT GGG (NP丁II)慕因。 PCR 检测结果表明.3 种花1年中仅矮牵牛的一 ATTG丁G CGT CA-3 ， PCR 产物大小为 195bp; 个样品为阳性，含有这 3 种转慕阁成分.酶切且在5E结果验证了 NOS A 为 5 一A丁C GTT CAA ACA TT丁 GGC PCR 产物为非假阳性。 A…3 ， NOS-B 为 5 …ATT GCG GGA CTC TAA 关键诩花卉转慕因 PCR 酶切鉴定 1 前窗 丁CA TA-3 ， PCR 产物大小为 165bp; NPTn-1 为 5 … AGG CTA TTC GGC TAT GAC 丁GG 一 3 , 转基因技术的发展带来了各种转基因生物及其 NPTII-2 为 5 一GCG GTC CGC CAC ACC CAG 产品，同时转3悲剧生物的安全性问题，也引起了人们 CCG-3 ， PCR 产物大小为 600忡。寻|物由上梅生工 的极大关注，许多国家都已实行转基因生物标识制 生物工程有限公司合戚，NPTII…1 、 NPTn…20 度。我回于今年 3 月 20 日起对农业转基因生物实施 2.2 方法 检验检娥和标识制度，各检验检疫口岸将进一步开展 2.2.1 3 种花卉 DNA 的提取 转基因产品的检测工作。聚合酶链反应(PCR)是近年 CTAB 微量法:菊花、矮牵牛、非洲菊各取来自不 来常用的一种快浦、灵敏的检测转慕因产品的方法， 同株的 2 个样品，每个样品取 O. 5g 新鲜叶片，加液氮 要求待分析的基因组 DNA 样品尽可能纯化，否则 研磨，加 600μ1 L 5 X C