hiv-1电化学活性-非活性开关分子信标的构建及验证 - 检验医学.pdf

·４０８· 检验医学２０１２年５月第２７卷第５期　ＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ，Ｍａｙ２０１２，Ｖｏｌ２７．Ｎｏ５． 文章编号：１６７３８６４０（２０１２）０５０４０８０４　　　中图分类号：Ｒ３７３　　　文献标志码：Ａ ＨＩＶ１电化学活性非活性开关分子信标的构建及验证 １ ２ １ ２ ３ １ １ １ 李　博 ，　顾大勇 ，　司徒博 ，　李政良 ，　颜晓慧 ，　刘芹兰 ，　郑　磊 ，　王　前 （１．南方医科大学南方医院检验医学科（系）临床快速检验实验室，广东 广州５１０５１５； ２．深圳国际旅行卫生保健中心，广东 深圳５１８０３３； ３．南方医科大学南方医院临床实验研究中心，广东 广州５１０５１５） 　　摘要：目的　构建人类免疫缺陷病毒１型（ＨＩＶ１）电化学活性非活性开关分子信标（ＣＡｓＭＢ）并验证其结 构及功能。方法　合成并纯化针对ＨＩＶ１ｇａｇ基因保守区序列的ＣＡｓＭＢ，用傅里叶变换红外光谱（ＦＴＩＲ）和循 环伏安法（ＣＶ）验证其结构，用差分脉冲伏安法（ＤＰＶ）信号强度评价 ＣＡｓＭＢ的识别功能。结果　胭脂红酸 （ＣＡ）单体与ＣＡｓＭＢＦＴＩＲ图的变化证明ＣＡ已标记于ＭＢ末端，ＣＶ图证明ＣＡｓＭＢ电化学活性ＯＮ和ＯＦＦ状 态的存在。ＤＰＶ结果证实其能够在电化学平台上实现对目标序列的特异性识别，且能够区分一个碱基的差异。 结论　ＣＡｓＭＢ作为ＨＩＶ１ｇａｇ基因的特异性识别元件有望用于构建新型ＨＩＶ１电化学基因传感器。 关键词：人类免疫缺陷病毒１型；分子信标；电化学基因传感器 　　ＴｈｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｉｏｎａｎｄｃｏｎｆｉｒｍａｔｉｏｎｏｆＨＩＶ１ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｌｙａｃｔｉｖｅｉｎａｃｔｉｖｅｓｗｉｔｃｈｉｎｇｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｅａｃｏｎ　 １ ２ １ ２ ３ １ １ １ ＬＩＢｏ，ＧＵＤａｙｏｎｇ，ＳＩＴＵＢｏ，ＬＩＺｈｅｎｇｌｉａｎｇ，ＹＡＮＸｉａｏｈｕｉ，ＬＩＵＱｉｎｌａｎ，ＺＨＥＮＧＬｅｉ，ＷＡＮＧＱｉａｎ．　（１．Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆ ＰｏｉｎｔｏｆｃａｒｅＴｅｓｔｉｎｇ，ＣｌｉｎｉｃａｌＬａｂｏｒａｔｏｒｙＣｅｎｔｅｒ，ＮａｎｆａｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳｏｕｔｈｅｒｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＧｕａｎｇｄｏｎｇＧｕａｎｇｚｈｏｕ ５１０５１５，Ｃｈｉｎａ；２．ＳｈｅｎｚｈｅｎＩｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌＴｒａｖｅｌＨｅａｌｔｈＣａｒｅＣｅｎｔｅｒ，ＧｕａｎｇｄｏｎｇＳｈｅｎｚｈｅｎ５１８０３３，Ｃｈｉｎａ；３．ＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｏｆ ＣｌｉｎｉｃａｌＭｅｄｉｃｉｎｅ，ＮａｎｆａｎｇＨｏｓｐｉｔａｌ，ＳｏｕｔｈｅｒｎＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＧｕａｎｇｄｏｎｇＧｕａｎｇｚｈｏｕ５１０５１５，Ｃｈｉｎａ） 　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏｃｏｎｓｔｒｕｃｔｈｕｍａｎｉｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙｖｉｒｕｓ１（ＨＩＶ１）ｅｌｅｃｔｒｏｃｈｅｍｉｃａｌｌｙａｃｔｉｖｅｉｎａｃｔｉｖｅ ｓｗｉｔｃｈｉｎｇｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｅａｃｏｎ（ＣＡｓＭＢ）ａｎｄｃｏｎｆｉｒｍｉｔｓｓｔｒｕｃｔｕｒｅａｎｄｆｕｎｃｔｉｏｎ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　ＣＡｓＭＢｔａｒｇｅｔｅｄｃｏｎｓｅｒｖｅｄ ｒｅｇｉｏｎｏｆＨＩＶ１ｇａｇｇｅｎｅｗａｓｐｒｅｐａｒｅｄａｎｄｐｕｒｉｆｉｅｄ．ＴｈｅｓｔｒｕｃｔｕｒｅｗａｓｃｏｎｆｉｒｍｅｄｂｙＦｏｕｒｉｅｒｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｆｒａｒｅｄ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｙ（ＦＴＩＲ）ａｎｄｃｙｃｌｉｃｖｏｌｔａｍｍｅｔｒｙ（ＣＶ），ｗｈｉｌｅｉｔｓｆｕｎｃｔｉｏｎｏｆｒｅｃｏｇｎｉｚｉｎｇｔａｒｇｅｔｓｗａｓｅｖａｌｕａｔｅｄｂｙｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｌ ｐｕｌｓｅｖｏｌｔａｍｍｅｔｒｙ（ＤＰＶ）．Ｒｅｓｕｌｔｓ　ＴｈｅｖａｒｉａｔｉｏｎｓｏｆＦＴＩＲｓｐｅｃｔｒａｏｆｆｒｅｅｃａｒｍｉｎｉｃａｃｉｄ（ＣＡ）ａｎｄＣＡｓＭＢｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔ