通过优化由软件控制的加、减速率离心分离单核细胞.PDF

实用技巧 通过优化由软件控制的加、减速率 离心分离单核细胞 概述 材料和步骤 如今越来越多的临床与细胞实验室 ® 1. 将 10ml Biocoll 细胞分离液（包括 Ficoll 400、Biochrom AG）在室温条件下 检验项目对快速处理样品提出了更高的 ® 加入 50ml 锥底离心管（Falcon 、BD Bioscience ）。 要求。对于样品分离的常规离心技术， 2. 用 HBSS（Hanks 平衡盐溶液，Invitrogen）将人血 2 倍稀释。 更是需要具有尽可能快的加速和与之相 3. 将 35ml 人血稀释液加入离心管使其覆盖于 Ficoll 层之上，注意不要将血和 应的减速，以缩短许多诸如培养细胞等 Biocoll 混合。 温度敏感的样品在离心机中存留过长的 4. 离心 30 分钟、1600 rpm（440 × g ），并设置是否使用Soft 功能的两组对照。 时间。Eppendorf 根据这方面应用的要 使用的离心机为 Eppendorf 5702，转子 A-4-38，锥底离心管适配器 求，开发并推出 5702、5702R、5702RH 5702 734.004。 系列离心机，已经成功地将离心机加速 5. 用数码相机分析梯度分离效果。 和减速时间缩短至 25 秒以内。 6. 将位于单核细胞层上的约 1cm 左右的 HBSS、血小板和血浆悬浮部分移去。 7. 用 10ml 移液器将单核细胞层小心地移至一个干净的 50ml 离心管，每管最多 除了速度，另一个影响或评价临床 加入 20ml，所有这些都在冰上操作。 与细胞实验室离心质量的指标是重混率。 8. 用 HBSS 将每管单核细胞浓缩液稀释配平至 50ml，充分混匀后离心 10 分钟、 在这一方面的技术改进体现为以秒为级 1600 rpm（440 × g ），注意关闭刹车键。 别的快速加减速同时兼顾柔和地保护样 9. 离心后弃去上清，将沉淀重悬于 1ml HBSS，重复步骤 7。 品，这项功能被称为 “Soft”功能，特别 10. 最后，离心后弃去上清，将细胞沉淀重悬于 5ml 培养基，细胞计数并检测细 适用于灵敏度要求很高的样品，如通过 胞大小。该步使用 50μl细胞培养液混合 10ml 计数液（Isoton Ⅱ，Bechmann 密度梯度离心法反复高效地分离细胞。 Coulter，Krefeld ），并使用Coulter 256 通道仪分析。 从全血中分离单核细胞以及之后 结果和讨论 对它们分别进行分类是细胞学实验室常 通过多种离心功能的应用，我们得到不同试验结果，最初通过目测分析梯度 规的一项操作，这类细胞主要包括 T 细 分离的效果，而后可以对富集得到的单核细胞的培养计数与分析，判断并验证目 胞、B 淋巴细胞和单核细胞。离心分离 测的分层效果。再次强调，该组实验所使用的样品血采自同一供体并分为四组对 单核细胞，目前主要是通过利用由多聚 比实验，两管使用 5702 型离心机，而另两管作为对照组使用 5810 型离心机的水 糖 Ficoll 形成的密度梯度来实现的。红 平转子 A-4-44 及相应的 5ml 锥形底离心管适配器 5804 758.