原位杂交组织化学.pdfVIP

DATA SHEET ProductInformation Product Name: 人 13 号染色体 DNA FISH 原位杂交染色系统 实验方法 Product Number: FISH200813# Store at: 4° C Size : 100T 1 寡核苷酸探针预杂交液 既用型 Product Number:FISH002 2ml 2 寡核苷酸探针杂交液 既用型 Product Number:FISH001 2ml 3 复合消化液 (P/E)PH:6.4 既用型 Product Number:TSP6044 6ml 4 50%去离子甲酰氨 10ml 5 2 X SSC 干粉 2000ml 6 硫氰酸钠溶液：16g 硫氰酸钠溶于 200mL 的蒸馏水。 10ml 7 细胞打孔液 10ml 8 13#染色人体 荧光探针 干粉 30ug （探针的配制：去离子水100ul，溶解 30ugSRY 探针，分装 5 支管，每管 6ug/20ul。-20 度冻存，可长期保存，避免反复冻融。临用前取一支分装好的探针，加入 1ml 探针稀释液 37 度 10 分钟混匀，即为-6ug/ml 的即用型探针杂交液。） 13 号染色体 FISH 荧光原位杂交基本的实验方法。（基因组DNA ） 基因组 DNA 荧光探针染色步骤 石蜡切片的复水 梯度乙醇复水：用纯水配制 95%-80%-60%-30%的梯度乙醇（3-5 分钟/次）。 细胞爬片/涂片/冰冻切片不需梯度乙醇，直接进行下一步实验。 1， 置打孔液中室温 10 分钟，给细胞打孔以改变组织细胞的通透性使探针快速顺利的穿透 细胞膜。 0.1M PBS 冲洗三次 5min/次-室温。 2 ， 70 摄氏度硫氰酸钠溶液孵育 10min，后 0.1M PBS 冲洗三次 5min/次-室温。 3， 滴加复合消化工作液，覆盖组织表面，37 度 10-30 分钟。（根据实验组织和实验的条件 情况确定消化时间和温度，需实验者摸索最佳条件。如条件成熟有利于杂交的顺利完成，具 体原理参照“组织细胞的通透性”和“复合消化液的配制”一章。甘氨酸终止消化。{甘氨酸溶 液：0.4g 甘氨酸溶于 200mL2 倍浓度的 PBS （2mg/mL ）} 0.1M PBS 冲洗三次 。4%多聚甲 醛后固定 10 分钟。PBS 洗涤 3 次：5min/次-室温。* 4 度乙醇梯度（30%-60%-80%-95% ）脱 水，室温干燥。0.2Xssc 洗一次（室温 3 分钟）。* 4 ， 滴加预杂交工作液覆盖组织 37 度湿盒孵育 2 小时,注意盖上原位杂交专用盖玻片（预 杂交工作液反应时间，需实验者摸索最佳条件，如条件成熟有利于杂交后的背景降低。如预 杂交工作液反应时间过长反而影响杂交信号。具体原理参照“预杂交原理”一章。 5， 预杂交后的洗涤—— 揭去盖玻片以 0.2Xssc 室温洗三次，每次洗涤 5 分钟。 6， 滴加杂交工作液覆盖组织 37 度湿盒孵育过夜。注意：探针浓度和时间需实验者摸 索最佳条件，具体原理参照“探针浓度和杂交时间”一章。 7， 杂交后的洗涤—— 揭去盖玻片以 37 摄氏度洗涤：50% 甲酰胺洗一次5min/次 2Xssc 37 天津市灏洋生物制品科技有限责任公司◆TIAN JIN HAO YANG BIOLOGICAL MANUFACTURE CO.,LTD 1 236# Baidi Road Nankai District Tianjin