人食管、胃、大肠癌组织中HSP70蛋白表达分析.pdfVIP

第l6卷第6期 平 顶 山 工 学 院 学报 V0I．16 No．6 2OO7年l1月 Journal of Pingdin~han Institute ofTechnology Nov．200r7 文章编号：1671—9662(2oo7)o6—0025—03 人食管 日日 、月、 大肠癌组织中HSP70蛋白表达分析* 屈二军 ，一，蒋达和 ，曹志贱 (1．武汉大学生命科学学院，湖北武汉430072；2．平顶山工学院生物工程系，河南平顶山467044) 摘 要：采用Westem Blot方法，检测、分析人食管、胃、大肠的正常组织、癌旁组织及癌组织中的HSP70 蛋白表达差异。在不同器官的不同组织中，HSP70的表达情况有较大差异。在人胃、食管、大 肠三个器官的正常组织、癌旁组织和癌组织中，HSP70的表达量依次升高。消化道癌组织中 大量表达的HSP70蛋白可能在上述组织癌变进程中起·定作用，为深入研究消化道肿瘤的致 病机理和治疗提供理论依据。 关键词：癌组织：Western Blot；HSP70 中图分类号：TQ937 文献标识码：A 恶性肿瘤是威胁人类健康的严重疾病，其发病率较高…1。为了解决这一难题人们对癌症进行了大量研究。但由于 癌症是一类非常复杂的疾病，其发病机理至今还没有被完全揭示。每种癌症的生物学特性都不同，即使是同一种癌症发 生于不同的个体，生物学特性也会表现出差异。 热休克蛋白(I-ISPs)又称应激蛋白(sP)，是机体细胞在一些应激原如环境高温、缺氧、重金属中毒、氧化应激、感染、饥 饿、创伤、代谢毒物等条件诱导下，激活lISP基因，高效表达的一组进化上高度保守的蛋白质，对机体免受应激因素的损 害具有重要作用 引。M( [ 】等按照其分子量大小将liSPs分为4个家族，即I~P90(83 90kDa)家族、}ISJ (66 78 kI)a)家族、HSP60家族及小lISP家族。此外还有分子量为100—110kDa而特性不同于上述家族的大分子lISP。HSP70为 热休克蛋白家族中最为重要的一族，有2o余个成员，进化上高度保守，被证实具有分子伴侣、抗细胞凋亡等重要生理作 用r3]。HSP70与肿瘤关系密切，在许多恶性肿瘤中HSP70、HSP27都有高表达[4l。本文主要探讨HSP70在消化道器官食 管、胃和大肠癌组织、癌旁组织和正常组织中的表达情况，以期为进一步研究消化道肿瘤的致病机理和治疗提供理论依 据。 1 材料和方法 1．1材料 1．1．1 实验样本 医院手术室提供的食管癌组织、胃癌组织、大肠癌组织及对应的癌旁组织和正常组织(上述材料均取自河南平顶山 市第一人民医院)。 1．1．2 主要试剂 丙烯酰胺、甲叉双丙烯酰胺、TEMED、SDS均为Sigma分装； 考马斯亮蓝(nuka公司)，HSP70、B—aetln抗体为鼠单抗(Santa Cruz公司)，羊抗鼠HRP—IgG(~t京中杉金桥生物公 司)，PVDF膜(加I工卫PoRE公司)，本实验所用的其它化学试剂为分析纯。 1．2 方法 1．2．1 各组织中细胞总蛋白的提取 (1)样本处理 将取得的每种样本，根据组织学特征，分别分离出癌组织、正常组织和癌旁组织，编号、标记后，置一70℃保存。 (2)匀浆 自冰箱取出样本，经剪切后，按照每lg加入2ml 30raM N~CO3溶液，以匀浆器研磨至浆状，倾入10ml离心管中，再取 30mM N~COs冲洗匀浆器，并倾入上述离心管中。 *基金项目：河南省科技攻关项目【0324410027) 收稿日期12007—11—01 第一作者简介：屈二军(19r75一)，男，河南平项山人，平项山工学院讲师，武汉大学在职研究生。 平顶山工学院学报 2O07年l1月 (3)离心 100000×g离心4h，将上清液转入 管，一20℃冰箱保存。 1．2．2 SDS一聚丙烯酰胺凝胶电泳 制备浓度为12％的SDS一聚丙烯酰胺凝胶。取相应样品加入等量的上样缓冲液100℃加热5min。10 000rpm／min离