基因及疾病2011.ppt

* * * * * * * * * PCR-SSCP分析原理示意 正常人 纯合突变 杂合突变 Leber 病患者 PCR/SSCP分析 + ﹣ （三）DNA序列测定是最直接、最准确的基 因诊断技术 例：四色荧光自动测序分析结果 微生物学、免疫学和血清学等方法检测 核酸分子杂交或PCR等技术， 细菌、病毒、支原体、衣原体、立克次体和寄生虫等 （灵敏度不高，或特异性较低，不能早期诊断） （可早期、快速、敏感、特异性高） （四）外源DNA检测 生物芯片（biochip bioarray)技术： 根据生物分子间特异性相互作用，将生化分析过程集成于芯片表面，从而实现对DNA、RNA、多肽、蛋白质等各种生物成分的高通量快速检测分析。 疾病诊断芯片 个性化用药芯片 例：基因芯片杂交结果 （三）基因表达异常的诊断 1. mRNA的相对定量分析 2. mRNA的绝对定量分析 3. mRNA长度分析 （1）斑点杂交或狭缝杂交： 从组织或培养的细胞中提取RNA 膜上的待测RNA样品与32P-labeled DNA探针杂交 放射自显影 正常对照组 实验组1 实验组2 DNA芯片检测的差异表达谱 第五节 肿瘤的基因诊断 策略一：易位染色体和融合基因检测 如T细胞受体基因TCR与IgH重排后，原先间隔数百bp的V区和J区靠近，通过扩增片段长度判断是否重排 从表达某一特定基因的组织中提取总RNA （2）RT-PCR法： PCR cDNA片段 吸光度扫描计算出相应的RNA含量 32P-dCTP PCR dNTP 测定放射性活度推算出mRNA的含量 逆转录 凝胶电泳 实验组 对照组 实验组 对照组 制备RNA样品 逆转录 电泳及定量分析 PCR 待测基因引物 参照引物（β-actin 等） cDNA第一链 内参照引物 β-actin 待测样品 一、遗传性疾病基因诊断 二、感染性疾病基因诊断 三、肿瘤基因诊断 四、法医学鉴定 第五节 肿瘤的基因诊断 策略二：癌基因和抑癌基因检测 如原癌基因K-ras第12、13和61位密码子点突变：GGT-TGT/GTT/GAT/GCT； 抑癌基因p53密码子130～290之间的基因突变 第五节 肿瘤的基因诊断 策略三：病毒癌基因检测 多种DNA或RNA病毒感染与肿瘤相关 第五节 肿瘤的基因诊断 策略四：肿瘤标志物检测 tumor marker: 肿瘤组织产生的、与肿瘤发生发展相关的物质，如肿瘤抗原、激素、酶等。 第六节 感染性疾病的基因诊断 通过对不同病源微生物遗传物质DNA或RNA的检测展开 三、基因诊断的应用 遗传疾病 肿瘤 感染性疾病，传染性流行病 判断个体疾病易感性 器官移植组织配型 法医学中个体识别、亲子鉴定 * * * * * * * * * * * * 基因诊断的概念 基因诊断的出现：1976年加州大学华裔科学家 Kan YW用核酸分子杂交首次对一例α珠蛋白生成障碍性贫血进行诊断 狭义:在基因（DNA或RNA)水平，用PCR、核酸杂交、基因重组、基因芯片等各种分子生物学技术检测特定基因存在与否、结构变异和表达状态的过程，对疾病作出诊断。 基因诊断的概念 特点 针对性强 特异性强 灵敏度高 适应性强 一、基因诊断的概念和特点 定义 利用现代分子生物学和分子遗传学的技术和方法，直接检测基因结构及其表达水平是否正常，从而对疾病作出诊断的方法。 是以DNA和RNA为诊断材料，通过检查基因的存在、缺陷或表达异常，对人体状态和疾病作出诊断的方法和过程。 基因诊断（gene diagnosis） 是检测DNA或RNA的结构变化与否，量的多少及表达功能是否正常，以确定被检查者是否存在基因水平的异常变化，以此作为疾病确诊的依据。 基本原理 临床意义 对疾病作出早期、确切诊断 确定个体对疾病的易感性 疾病的分期分型 疗效监测 预后判断 一、基因诊断中常用的分子生物学技术 （二）聚合酶链式反应（PCR） （三）单链构象多态性检测 （四）限制酶酶谱分析 （五）DNA序列测定 （六）DNA芯片技术 （一）核酸分子杂交 （一）基因突变的诊断 1. 点突变的诊断 2. 少数核苷酸缺失或插入的诊断 3. 大片段丢失或插入的诊断 4. 基因重排（染色体易位）的