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用根尖微核测定技术测定硫酸铜的毒性 曹成成 罗 劫李秋霞 陈祥杜智 (武昌工学院湖北武汉430065) 摘要 用根尖微核测定技术检测了不同硫酸铜浓度对幼苗芽长、根长和根尖微核率的影响。实验结果表明：硫酸铜对蚕 豆、玉米的根和芽的生长有显著抑制作用，25m班～150mg／IJ浓度范围内，微核率明显增加，铜对植物生长有明显毒性作用。 关键词蚕豆微核硫酸铜毒性 中图分类号：×502 文献标识码：B 文章编号：1672—9064(2014)01一090一02 铜是动植物生长必需的一种微量元素．硫酸铜作为杀菌 失或断裂，从而在胞浆中形成一个或数个微核。微核也有可 剂和杀虫剂被广泛的应用于水产养殖和农作物病虫防治．硫 能是细胞凋亡的产物．诱变因素可激活内切酶，切割DNA形 酸铜做化肥可使农作物显著增产．但过量的铜会对动植物产 成细胞核碎片．最终导致更多微核…。通过显微镜可观察到 生毒害作用。根尖微核测定是《环境监测技术规范》列出的一 微核时．可通过以下几点鉴别微核：直径是主核的l，20～l／3； 种重要的生物监测技术．主要用于环境中诱变剂的检测和致 与主核在一个焦点平面上：与主核的颜色、结构特征及折光 突变研究．当外界环境中存在诱变剂时．细胞会产生染色体 性一致：椭圆形或圆形，边缘光滑整齐；与主核明显分离[5引。 断片形成微核．微核技术可用于定量检测基于微核数量与外 采用微核率和污染指数(P10～1．5基本无污染，1．5～2．0轻污 界诱变因子的强弱程度成正比-一：。本文用蚕豆根尖微核测定 染．2．0～3．5中污染．3．5以上重污染…)来衡量影响的程度，计 技术检测了硫酸铜对蚕豆幼苗芽长、根长和根尖细胞微核率 算公式如下： 的影响。 l 实验方法 数PI=样品MCN‰平均值／对照MCN‰平均值。 (1)材料和试剂。蚕豆：华中师范大学研发的松滋青皮蚕 (4)统计分析。利用Excel2010进行t检验，检验不同实 验组与对照值之间差异显著性．P0．叭表示差异显著，P 豆；硫酸铜溶液：25mg，L、50m班、75mg，L、100mg，L、150mg，L 5个浓度水平的溶液。 0．001表示差异极显著。 (2)方法。实验包括浸种、催芽、染毒处理、恢复培养、制 2实验结果 片、镜检等主要过程[2]。选择饱满、大小均匀的种子，用蒸馏 (1)硫酸铜对根长的影响。由表l可知。经过t检验，5种 硫酸铜浓度下．蚕豆的试验组与对照组出现了极显著差异 水洗净和0．5％的NaCl溶液清洗后无光培养24h(25℃)。待 种子初生根后移到培养皿中催芽．25℃恒温培养48h。取催(P0．001)，说明硫酸铜对蚕豆幼苗根长有显著影响。随着硫 芽后生根发育良好的种子染毒处理．用硫酸铜溶液浸泡培养 酸铜浓度的增加．蚕豆组的根长均变短。抑制作用明显，对蚕 24h．并用蒸馏水作空白对照。将染毒处理后的种子用蒸馏水 豆的抑制率为8．8％～71．7％、单株最大抑制率达74％。根系是 浸洗并于培养皿恢复培养24h。将培养皿中的种子取出，测 植物与土壤环境接触的重要界面．在重金属环境下会造成根 量根和芽的长度．切取长度约5mm的根尖制片镜检。根尖用 系生理代谢失调、吸收能力减弱，进而抑制植物的生长…。 改良卡诺固定液(无水乙醇与冰醋酸体积比3：1配置而成) (2)硫酸铜对芽长的影响。由表2可知，5种浓度下，试验 固定24h．转移至70％乙醇中于0～4℃下保存，加入1mol几组与对照组相比，差异极显著(P0．001)，硫酸铜对蚕豆芽长 有显著影响．随着硫酸铜浓度的增加抑制越为明显，抑制率 HCl在60℃水浴下离解8～10min．直至根尖软化．在避光条 件下用改性石碳酸品红【34]浸泡染色2～3h，用乙醇和蒸馏水为8％～68％。铜是植物生长