玻璃微流控芯片十二烷基硫酸钠无胶筛分电泳测定免疫球蛋白片段分子量.pdfVIP

第36卷 分析化学(FENXIHUA)【UE)研究报告 第6期 2008年6月 Chinese of 719—723 JournalAIlalyticalChemistry 玻璃微流控芯片十二烷基硫酸钠无胶筛分电泳 测定免疫球蛋白片段分子量 黄淮青 戴忠鹏 秦建华 林炳承’ (中国科学院大连化学物理研究所。大连116023) 摘要通过实验优化了葡聚糖筛分介质和运行缓冲溶液的浓度。采用十二烷基硫酸钠(SDS)无胶筛分电泳 分离体系(10％(w／v)葡聚糖，0．1％SDS，10％甘油，0．2 mol／LTris．硼砂，pH8．3的缓冲液)在自制的玻璃微流 控芯片上高效分离了BODIPY衍生的蛋白质分子量标准样品，连续6次电泳所得迁移时间的相对标准偏差均 小于0．50％。以6种蛋白质分子量的对数对其迁移时问作图，线性回归良好(r=0．994)。采用该芯片电泳 分析体系对免疫球蛋白G不同片段的分子量进行了测定。所得结果与实际基本相符。 关键词微流控芯片，十二烷基硫酸钠无胶筛分电泳，蛋白质，免疫球蛋白，分子量 1 引 言 单克隆抗体是仅由一种类型的细胞产生的抗体，具有高度特异性、繁殖快、副作用小等突出优点，自 1975年首次用B淋巴细胞杂交瘤技术制备出单克隆抗体…以来，单克隆抗体技术已在基础研究和临床 诊疗中得到了广泛应用【2’3 J。单克隆抗体的规模化生产迫切需要提供一种高效分析手段对单克隆抗体 的理化性质(分子量等)进行即时监测。测定蛋白质分子量的传统方法主要是SDS一聚丙烯酰胺凝胶电 泳法(SDS—PAGE)M-6]，但是该法存在上样量大、染色费时、操作过程繁琐、重现性差等缺陷。 毛细管电泳分离以电渗流为主要驱动力，通过电压切换即可实现液体流动、进样和分离，目前逐渐 成为单克隆抗体片段分析的首选技术。卜9|。最近几年，以毛细管电泳为核心技术，以微流控芯片为操作 平台的微流控芯片电泳技术迅速崛起，并成为微全化学分析系统的主流技术[10|，推动了分析科学向超 微、高通量、集成化方向发展。与传统毛细管电泳相比，微流控芯片电泳具有试样消耗量少、分离效率 高、分离速度快、操作简单、设备易于微型化等突出优点。最初的微流控芯片SDS凝胶电泳法采用将凝 胶颗粒填充在微流控芯片的通道内，在35s内分离了分子量从9—11．6kD的6种蛋白质，但该方法存 在凝胶柱制备困难、寿命短等缺点¨¨。而无胶筛分电泳作为凝胶电泳的一种替代技术。在实际应用中 更为广泛。Agilent公司利用无胶筛分电泳分离模式，设计出一台根据蛋白质的分子量大小分离蛋白质 并进行定性和定量的仪器(Agilent2100蛋白质分析仪)¨2。。本研究以自制的玻璃微流控芯片为平台， 优化了SDS无胶筛分电泳分离体系，在该优化的条件下对抗体免疫球蛋白G在不同处理条件下所得不 同片段的分子量进行精确测定，为单克隆抗体规模化生产过程中的质量监控提供了重要技术参考。 2 实验部分 2．1仪器与试剂 Tool 本实验在激光诱导荧光芯片仪(MicrofluidicKit，MicralyneInc．，Canada)上进行，激光器为 532 nln半导体泵浦固体激光器，详细情况参见文献[13]。 kD)、 20074)7-13收稿；2007·10-28接受 本文系国家自然科学基金资助项目(No ·E·mail：bclin@dicp．卵．ell 分析化学 第36卷 二硫苏糖醇、免疫球蛋白G(IsG)、溶菌酶、酞酸酐酶、鸡卵白蛋白、人血清白蛋白、伴清白蛋白和磷酸化