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实验技术问答题 1、移液器的正确使用方法 答：⑴ 要根据移液体积选择合适的移液器。在调整取液量的旋钮时，不要用力过猛，并应注意计数器显示的数字不要超过其可调范围然后缓慢平稳地松开按钮,吸进液体，等一秒钟，然后将吸头提离液面，贴壁停留2-3 秒，使管尖外侧的液滴滑落。放液将吸头口贴到容器内壁底部并保持倾斜。压住按钮排出液体。压住按钮同时提起器,使吸头贴容器壁擦过。松开按钮按吸头弹射器除吸头。大多数细胞所需pH 在 7.2 - 7.4.但是,细胞培养最适pH值随培养的细胞种类不同而不同.成纤维细胞喜欢较高pH (7.4 - 7.7), 而传代转化细胞系则需要偏酸pH (7.0 - 7.4)一般培养基中大都使用HCO3-/CO32-/H+ 作为pH 的缓冲系统， 而培养基中NaHCO3 的含量将决定细胞培养时应使用的CO2 浓度。当培养基中NaHCO3 为每升1. g 时， 则应使用5 % CO2 培养细胞 为何培养基保存于4 °C 冰箱中， 颜色会偏暗红色， 且pH值会越来越偏碱性？ 答：培养基保存于4 °C 冰箱中， 培养基内之CO2 会逐渐溢出，造成培养基越来越偏碱性。而培养基中之酸碱指示剂(通常为酚红-酸性培养液呈橙黄色,碱性培养液呈深红色 的颜色也会随碱性增加而更偏暗红。培养基偏碱的结果， 将造成细胞生长停滞或死亡。 4、动物细胞培养的条件有哪些无菌无毒的环境营养与体内基本相同适宜的温度和酸碱度气体环境胰酶有什么作用？ 答：胰酶的主要作用是使细胞间的蛋白质水解，使细胞相互离散。胰酶对细胞的分离作用与细胞的种类和细胞的特性有密切关系。一般来讲，胰酶浓度大、作用温度高、作用时间长，对细胞分离能力也大，但超过一定的限度会损伤细胞。胰酶溶液在pH8.0，温度为37时，作用能力最强。注意：钙离子、镁离子和血清蛋白的存在会降低胰酶活力。因此，胰酶溶液常用无Ca2+、Mg2+的D-Hanks’ 平衡盐溶液配制成0.25%溶液 6、用台盼蓝鉴别细胞死活时，为什么活细胞不作色，死细胞核呈蓝色？ 答：因为当细胞死亡时，染料通过变性的胞膜与解体的细胞核DNA结合，而使其染色。 7、超净工作台工作区内的所有物品均应排放整齐，以免干扰气流方向。应即时将工作台内的闲置物品撤离出去，并且不得堵住气流的进口生物安全柜与洁净台的主要区别在于生物安全柜主要是保护操作者和环境，也可保护受试样品并防止交叉污染的发生，生物安全柜是一种负压的净化工作台，结构比洁净台复杂，操作区气体负压，气体净化后排放；洁净柜保护操作样品，不保护操作者及环境，操作区处气体正压，操作区外气体直接排放。考马斯亮蓝法测定蛋白质含量时间内达到平衡，其结合物在室温下内保持稳定蛋白质含量蛋白质-考马斯亮蓝色素结合物在nm波长下有最大光吸收。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合完成反应十分迅速；在2min左右的时间内达到平衡，其结合物在室温下1h内保持稳定。反应非常灵敏可测定微克级蛋白质含量蛋白质-考马斯亮蓝色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。蛋白质含量时蛋白质含量时用棉塞或插有针头的胶塞封瓶口三角瓶中的液体不超过总体积的50%,否则当温度超过100时,培养基会喷溢,造成培养瓶壁和封口膜的污染. 27、高压灭菌时，是否可以将高压灭菌器内物品塞满？为什么？ 答：消毒物品不能装得太满，物品之间留有空隙，利于消毒器内蒸汽的流动 RCF : 相对离心力(g) r：离心沉淀半径(cm) n：转速（转/min）相对离心力不仅与转速相关，而且也与离心沉淀半径相关。在相同的转速的情况下离心转子直径越大， 相对离心力就越大。 30、实验室内的灰尘会对实验室的仪器产生何种影响？ 答：⑴灰尘落在仪器的光学表面，会使光学元件的透光度或反射率降低，因而直接影响仪器的灵敏度；而且细致弥漫的灰土是仪器杂散光的主要来源之一。杂散光会导致仪器背景升高，分辨率降低，测定精度下降。 ⑵电子系统集尘会造成电路或元件短路，接触不良。 ⑶对精密机械部分来说，灰尘可以使零件磨损、生锈、腐蚀、发霉。 31、生物安全实验室共分几级？进行未知背景的血液样品实验的实验室生物安全水平应该达到几级？ 答：生物安全实验室共分四级。进行未知背景的血液样品实验的实验室生物安全水平应该达到二级。 32、pH电极被蛋白质污染后电极响应很差，应该如何处理？ 答： pH电极被蛋白质污染后可以用1μg/ml胃蛋白酶溶液浸泡数分钟（或放在小型超声清洗仪上超声数分钟，随后用纯水冲洗干净。