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实验汇总本科生:1.总糖含量测定（斐林试剂）1.1步骤总糖含量的测定包括还原糖和转化糖含量的测定。还原糖的测定：用移液管移取提取液10mL，转入100 mL锥形瓶，用蒸馏水定容后装入酸式滴定管，然后用移液管移取斐林液A、B各5 mL于250 mL锥形瓶，摇匀后加蒸馏水约30 mL，在电炉上煮至沸腾，继续保持溶液沸腾，用样品液滴至蓝色大部分褪去后加2滴亚甲基蓝，继续滴至溶液转为砖红色，记录样品液滴定值（mL），重复3次。转化糖的测定：用移液管取提取液10 mL，转入100 mL锥形瓶，加6mol/L的HCL5mL，于沸水浴上水解15分钟，溶液冷却后，用NaOH中和（先用6mol/L的NaOH约5mL，再滴加0.56mol/L 的NaOH），滴入2滴酚酞指示，加NaOH至溶液显红色即为终点，此为转化糖待测液，定容至100 mL，将转化糖装入酸式滴定管，用以滴定斐林液，方法同还原糖测定，记录样品滴定值（mL），重复3次。1.2结果计算还原糖（g/100mL）=D*1000/V1,转化糖（g/100mL）=D*1000/V2，蔗糖含量（g/100mL）=（转化糖含量-还原糖含量）*0.95，总糖含量(g/100mL)=还原糖含量+蔗糖含量。（其中D：10 mL斐林液相当的葡萄糖量g ，V1：还原糖滴定值（mL），V2：转化糖滴定值（mL））2.Vc含量测定(2，6-二氯靛酚滴定法)2.1步骤用移液管移取提取液5 mL，用1%草酸稀释，定容至50 mL，用移液管移取稀释液5 mL至50 mL锥形瓶，通过半微量滴定管滴入2，6-二氯靛酚，直至溶液呈粉红色30秒内不消失，记录2，6-二氯靛酚用量（mL），重复3次。2.2结果计算 维生素C含量(mg/100mL)=V*A*C*100/B(其中V：2，6-二氯靛酚用量（mL），A：每毫升2，6-二氯靛酚相当的维生素C的量，C：样品稀释倍数，B：滴定用样品量（mL）)3.Vc含量测定(2，4-二硝基苯肼法)3.1步骤称50g鲜样和50mL2%草酸溶液，倒入捣碎机中打成匀浆，取10～40g匀浆(含1～2mg抗坏血酸)倒入100mL容量瓶中，用1%草酸溶液稀释至刻度，混匀。将稀释液过滤，滤液备用。不易过滤的样品可用离心机沉淀后，倾出上清液，过滤，备用。取25mL上述滤液，加入2g活性炭，振摇1min，过滤，弃去最初数毫升滤液。取10mL此氧化提取液，加入10mL2%硫脲溶液，混匀。于四个试管中各加入4mL稀释液。一个试管作为空白，在其余三个试管中加入1.0mL2%2，4-二硝基苯肼溶液，将所有试管放入37±0.5℃恒温箱或水浴中，保温3h。3h后取出，除空白管外，将所有试管放入冰水中。空白管取出后使其冷到室温，然后加入1.0mL2%2，4-二硝基苯肼溶液，在室温中放置10～15min后放入冰水内。其余步骤同样品。当试管放入冰水后，向每一试管中加入5mL85%硫酸，滴加时间至少需要1min，需边加边摇动试管。将试管自冰水中取出，在室温放置30min后比色。标准曲线绘制：加2g活性炭于50mL标准溶液中，摇动1min，过滤。取10mL滤液放入500mL容量瓶中，加5.0g硫脲，用1%草酸溶液稀释至刻度，抗坏血酸浓度20μg/mL。取5，10，20，25，40，50，60mL稀释液，分别放入7个100mL容量瓶中，用1%硫脲溶液稀释至刻度，使最后稀释液中抗坏血酸的浓度分别为1，2，4，5，8，10，12μg/mL。按样品测定步骤形成脎并比色。以吸光值为纵坐标，以抗坏血酸浓度(μg/mL)为横坐标绘制标准曲线。3.2结果计算维生素C含量(μg/100g)=C*V*F*100/(W*1000), C为由回归方程算得“样品稀释液”中抗坏血酸的浓度，μg/mL；V为样品用1%草酸溶液定容的体积，mL；F为样品氧化过程中的稀释倍数；W为样品重量，g。4总酸含量测定（酸碱中和滴定）4.1步骤用移液管移取提取液5 mL，转入100 mL锥形瓶，加2滴酚酞，用0.1mol/L的NaOH滴定至溶液出现粉红色不消失为止，记录NaOH用量（mL）,重复3次。4.2结果计算 总酸含量（g/100mL）=V*N*0.067*100/B(其中V：NaOH滴定值（mL），N：NaOH的浓度（mol/L），B：滴定用样品量（mL），0.067：苹果酸折算系数)5叶片中叶绿素含量测定5.1步骤称取植物鲜叶0.50g（可视叶片叶绿素含量增减用量），剪碎放入研钵中，加少量碳酸钙粉和石英砂及80﹪丙酮充分研成匀浆，过滤，滤液入25ml容量瓶中，用80﹪丙酮反复洗涤残渣至滤纸无绿色，合并滤液，定容，摇匀，即得叶绿素提取液。取上述提取液1ml稀释至10ml，摇匀。以80%丙酮为参比液，在663，645 nm波长下测定吸光度值。5.2结果计算Ch