泛素在小鼠胚胎植人中的作用.pdfVIP

第7卷第6期 潍坊学院学报 V01．7。No．6 2007年11月 Journal of Weifang University NOV．2007 泛素在小鼠胚胎植人中的作用 郭淑华 (潍坊学院，山东 潍坊 261061) 摘 要：选择lactacystin作为泛素(Ubiquitin，uPP)的抑制剂，采用宫角注射的方法，研究了UPP对小 鼠胚胎植入的作用。结果表明，小鼠胚胎植入受UPP的影响。 关键词：宫角注射；胚胎植入；抑制剂 中图分类号：Q492 文献标识码：A 文章编号：1671—4288(2007)06—0062—02 UPP是一种广泛分布并高度保守的由76个氨 道栓，以见栓的当天记为妊娠第l天。 基酸组成的多肽链 J。最初是从小牛的胰脏中分离 1．2．2 宫角注射 出来的，后来又发现其存在于很多组织和器官中，绝 取妊娠第1天的小鼠24只，其中12只作为对 大多数真核生物细胞中都存在，功能多样，目前研究 照，另12只用戊巴比妥纳麻醉，腹部用75％酒精棉 较多的是它与细胞受体蛋白共价结合，介导特定蛋 球消毒后，沿腹中线两侧近卵巢处切一小口，在卵巢 白质降解。同时，它还参与了各种细胞过程，其中包 与子宫的交界处(子宫角)用小号针头向子宫腔内 括细胞分化和发育、神经网络发生、血管生成、DNA 注射lactacystin(5 I／只)，然后迅速缝合刀口，对照 修复以及细胞程序化死亡 ；有研究报道，在生殖系 组和处理组分别于妊娠第5、6、7天首先微静脉注射 统中，它参与正常月经周期、甾体激素受体的调节以 台盼蓝，10 min后处死小鼠，然后根据台盼蓝标记的 及妊娠早期子宫内膜的组织重建 j。但它在胚胎植 胚胎着床位点统计对照组和实验组胚胎植入的数 入过程中的作用未见报道。本实验选择lactacystin 量。 作为uPP的抑制剂，lactacystin是蛋白水解酶复合体 1．2．3 微静脉注射 26S亚基活性的特异性抑制剂，给小鼠宫角注射适 分别取妊娠第5—7天的小鼠，用乙醚轻度麻 量的lactacystin，然后分别对妊娠不同天数小鼠的胚 醉，然后用生理盐水浸泡过的棉球将尾巴擦洗干净， 胎植入个数进行统计，旨在研究UPP对小鼠胚胎植 两条较大的静脉位于尾巴正中两侧的皮下，左手食 入的影响，为将来进一步探讨UPP究竟影响胚胎植 指压在血管的上方，阻止血液回心，使血管扩张，拇 入的哪一种相关基因打下了基础。 指将尾部固定住 ，取1支2 mL注射器，吸取 1 材料和方法 0．3—0．4 mL 1％台盼蓝，针头微倾斜插入静脉，将 1．1 实验材料 台盼蓝缓慢注入小鼠体内。注射台盼蓝10 min后， 实验所用动物为成年BALB／c小鼠，体重18— 断颈椎法处死小鼠，剪开腹腔，掀开内脏，暴露出子 22 g，由中科院动物所生殖实验室饲养；动物饲养于 宫，子宫上的蓝色小点就是台盼蓝标记的着床点。 人工条件下，室温22℃，光照周期为12小时光照， 1．3 数据分析 l2小时黑暗，自由取食、饮水。 实验结果用平均值±标准误表示，t检验分析数 所用生化试剂和台盼蓝购于北京化学试剂公 据，P0．05为显著差异。 司，泛素抑制剂(1actacystin)购于sigma公司。 2 结果 1．2 实验方法 2．1 台盼蓝标记的胚胎着床位点 1．2．1 妊娠小鼠的制备 台盼蓝标记的胚胎着床位点见图1。蓝色的小 取健康成年BALB／c雌雄小鼠若干只，于当天 点为胚胎植入点。在胚胎植入点处，毛细血管的通 下午5时按雌雄2：1的比例合笼，次日早上检查阴 透性大，台盼蓝透过毛细血管进入胚胎，以此来标记 收稿日期：2006—10—21 作者