中嘉8号杨抗生素敏感性测定.PDFVIP

第 １５卷第 ５期 中国生态农业学报 Vol．１５　 No．５ ２００７ 年 ９ 月 ChineseJournalofEco Agriculture唱 Sept．，　２００７ “ 中嘉 8 号杨” 抗生素敏感性测定 郑　进 　康　薇 　刘凯于 　 彭建新 　 洪华珠１ １ ２ ２ ２倡 （１．黄石理工学院　黄石　４３５００３； ２．华中师范大学农药与化学生物学教育部重点实验室　 武汉　４３００７９） １ ２ Atestforthesensitivityof Populusdeltoids Ⅰ－６３× Ⅰ－６９ toantibiotics．ZHENGJin，KANGWei ，LIUKai Yu ，PENG唱 ２ ２ Jian Xin唱 ，HONGHuaZhu （１．HuangshiInstituteofTechnology，Huangshi ４３５００３，China；２．KeyLaboratoryofPesticide唱 andChemicalBiology，Ministryof Education，CentralChina Normal University，Wuhan ４３００７９，China），CJEA，２００７，１５ （５）：２１９～２２０ （ReceivedDec．１，２００５；revised March ８，２００６） 　 　 “ 中嘉８号杨” 是从美洲黑杨（Populusdeltoids）Ⅰ－６３× Ⅰ－６９ 实生后代中选育的杨树新品系，以速生、 丰产、优质成为我国南方平原湖区主栽品种。 近年来由于单一栽植、栽植面积大、经营管理滞后及气候等原 因，“ 中嘉８号杨” 种质退化问题日益突出。 杨树是林木基因转化的模式植物，农杆菌介导法是杨树基因转化 ［１］ ［３］ 的主要方法 ，抗生素是农杆菌介导中常用的抑菌剂和选择剂，用于杀灭农杆菌或筛选转化体 ，抗生素对 不同植物组织培养的影响存在差异。 杨树不同株系遗传差异明显，应针对不同杨树品种选用不同的转化体 系［２］ 。 目前有关“ 中嘉８号杨” 基因转化的研究尚未见报道。 本实验研究了抗生素对“ 中嘉８号杨” 叶片诱导 愈伤组织和不定芽形成的影响，为建立和优化“ 中嘉８号杨”基因转化体系提供依据。 1　 实验材料与方法 供试“ 中嘉 ８ 号杨” 组培苗由华中师范大学农药与化学生物学教育部重点实验室培育。 卡那霉素 （Kanamycin）、噻孢霉素（Cefotaxime）、羧苄青霉素（Carbentcillin）、链霉素（Streptomycin）由美国Duchefa公司 生产。 在继代 ２５d组培苗上选取颜色正常、充分展开的第 ４ 片或第 ５片叶为外植体，叶大小、形状和色泽基 本一致。 剪去叶尖（深达主脉）和边缘，以叶尖剪口处与培养基接触方式接种。 叶片分化培养基为 MS＋ BA ０．２mg／L＋ NAA ０．０２mg／L＋ 抗生素＋ 蔗糖 ２５ ／L＋ 琼脂 ７ ／L，所用抗生素为噻孢霉素、羧苄青霉素和g g 链霉素，每种抗生素设０mg／L、５０mg／L、１００mg／L、２００mg／L、３００mg／L、４００mg／L 和５００mg／L ７个处理，每处 理１５瓶，每瓶接种 ３个外植体。 培养条件为温度２５℃ 、相对湿度 ７５％ 、光照 １６h／d、光强２０００Lx（下同）。接 种 ３０d观察愈伤组织、不定芽发生情况，并计算愈伤组织、不定芽诱导率： 诱导出愈伤组织外植体个数 愈伤组织诱导率＝ × １００％