生物选修三 大肠杆菌的培养与分离.pptVIP

现代生物技术的目的 对生物体进行改造，培育出具有优良品质的动物、植物、微生物新品系。 利用微生物、动物、植物为反应器对原料进行加工，生产出人类所需要的产品。 进行疾病的防治、诊断和治疗。 环境污染的检测 基因工程的主要原理 利用人工方法把生物的遗传物质，通常是脱氧核糖核酸（DNA）分离出来，在体外进行切割、拼装和重组。然后将重组了的DNA导入某种宿主细胞或个体，从而改变它们的遗传品性；有的还使新的遗传信息在新的宿主细胞或个体中大量表达，以获得基因产物。 细胞工程 细胞工程是利用细胞的全能性，在体外条件下，采用组织与细胞培养技术对动物、植物细胞进行修饰，为人类提供优良品种、产品和保存濒危物种。 植物细胞方面：植物组织培养和植物体细胞杂交，如花粉培养、组织培养、原生质体培养和细胞杂交等。这些技术都是用来繁殖和培育新品种的。 动物细胞方面，主要包括细胞培养、细胞融合、单克隆抗体的产生、胚胎移植等。 一、基础知识： (一)微生物 细菌的外形与大小 细菌的营养类型 根据细菌所利用的能源和碳源的不同将细菌分为两大营养类型。 自养菌: 异养菌: 腐生菌 寄生菌 大部分病原菌 单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。 菌落是鉴定菌种的重要依据。 二、大肠杆菌的培养和分离实验操作 （一）器具的灭菌 P20 无菌操作的首要条件是各种器皿必须是无菌的，如各种大小的培养皿、试管、三角瓶、取样器的头（枪头）、移液管、三角刮刀、接种环、镊子等等。这些用具通常用高压蒸汽灭菌法灭菌。 灭菌前各种用品均需用牛皮纸或报纸包好。培养皿可以几个包在一起；试管加棉花塞或塑料盖后也是几个包在一起；三角瓶可用封口膜（即通气又不使细菌进入）或6层纱布封口，再用牛皮纸或报纸封口；移液管上端用镊子放入少量棉花，再用牛皮纸包上。。。 在121度（1kg/cm2压力）下灭菌15分钟。 *实验中所需的棉花不能用脱脂棉，因脱脂棉易吸水，吸水后容易引起污染。 灭菌后通常见实验用具放入60-80度烘箱中烘干，以除去灭菌时的水分。 在进行实验操作前，将需要使用的用具从烘箱中取出，放到超净台上然后打开紫外灯和过滤风，灭菌30min。 实验1 大肠杆菌的培养和分离 步骤与操作: 1、将LB固体和液体培养基及培养皿灭菌 2、将灭菌后冷却到60℃的LB固体培养基倒入灭菌过的培养皿中，制备培养基平板。 3、将大肠杆菌从斜面接种到LB液体培养基中，在37 ℃摇床中振荡培养12h。 4、用接种环取振荡培养后的菌液，在固体培养基平板上划线，然后将划线后的培养皿置于37 ℃恒温培养箱中培养12-24h，观察菌落。 5、用接种环取单个菌落，划线接种于斜面上，37 ℃恒温培养箱中培养24h，再放入4 ℃冰箱保存。 平板划线的操作方法 交叉划线法 连续划线法 1、划线 分离法 无菌操作 台上用接种 环取菌后在 固体培养基 的平板上连 续划线. （五）大肠杆菌的划线分离 平板划线的操作 不能使用脱脂棉，否则容易吸水，造成污染。 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。 1.接种环只蘸一次菌液,但要在培养基 不同位置连续划线多次。 2 平板划线时不能划破培养基 3.划线首尾不能相接 4.划线后,培养皿倒置培养12~24h 注意事项： 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。 1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 答： 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物； 每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。 划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答：以免接种环温度太高，杀死菌种。 3.在作第二次以及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 答：