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体外传代培养对RPE细胞免疫活性影响【摘要】 目的研究体外传代培养对人类视网膜色素上皮（human retinal pigment epithelialium，HRPE）细胞免疫活性的影响。方法采用流式细胞术检测原代及传代HRPE细胞（第1、2、3、4、5、6代）表面HLA-ABC、HLA-DR和ICAM-1表达的变化。结果 HRPE细胞基础性表达HLA-ABC，低表达HLA-DR和ICAM-1；体外传代培养时HRPE细胞HLA-ABC表达下调，表达量与传代代数呈负相关(阳性细胞率：r = -0.924，P 与组织器官移植免疫排斥反应一样，RPE移植的免疫排斥始于宿主T淋巴细胞对移植物表面移植抗原的识别。这个识别过程需要抗原提呈细胞通过合适的刺激信号和共剌激信号经细胞因子信号传递途径将异体抗原提呈给T细胞。然而对于RPE移植，移植的是单一细胞到无血管的视网膜下腔，与其他移植不同的是缺乏供体抗原提呈细胞，此时不可能有供体抗原提呈细胞进行抗原提呈。此时有两种途径可引起宿主T细胞识别异体抗原。第一种途径是由RPE细胞自身做为抗原提呈细胞而不需宿主抗原提呈细胞，这为直接途径。另一种途径是通过宿主抗原提呈细胞（如脉络膜树突状细胞、巨噬细胞和视网膜小胶质细胞）呈递RPE细胞的MHC分子，此为间接途径。直接途径中T细胞识别MHCⅡ分子阳性的细胞，这在早期移植排斥反应中起主要作用。间接途径中T细胞识别由抗原提呈细胞提呈的同种异体MHCⅡ分子而在慢性移植排斥反应中起重要作用。研究发现正常HRPE细胞基础性表达HLA-ABC，低表达HLA-DR及ICAM-1〔２，３〕。因此，RPE细胞移植排斥反应主要是慢性排斥反应 T细胞的激活需要两种信号：第一信号主要来自T细胞的TCR与MHC分子-抗原复合物的特异性结合，CD4和CD8分子作为共受体分别与MHC-Ⅱ和MHC-Ⅰ类分子结合，增强T细胞与抗原提呈细胞间的粘附作用，参与第一信号的启动和转导；第二信号又称协同剌激信号，主要由T细胞和抗原提呈细胞表面粘附分子对的相互作用提供，最重要的是T细胞表面CD28分子与抗原提呈细胞表面相应配体B7-1（CD80）和B7-2（CD86）的结合。此外抗原提呈细胞细胞表达的其他协同剌激分子还包括VCAM-1、ICAM-1和LFA-3，它们分别与T细胞表面的VLA-4、LFA-1和CD2分子结合，共同提供T细胞活化的第二信号〔４-６〕 研究发现体外传代培养时HRPE细胞HLA-ABC表达下调，表达量与传代代数呈负相关；体外传代培养时HRPE细胞ICAM-1表达上调，表达量与传代代数呈正相关；体外传代培养后HRPE细胞HLA-DR表达无明显变化。所以应用体外传代培养HRPE细胞进行移植时，由于HRPE细胞HLA-ABC表达下调，抗原性下降，可降低急性排斥反应的发生率。但由于ICAM-1表达增高，一方面可促使宿主白细胞迁移至视网膜下腔作为抗原提呈细胞，另一方面可增加T细胞激活的协同剌激信号，从而促进慢性排斥反应的发生 参考文献 〔1〕Enzmann V, F Faude, P Wiedemann et al. Immunological problems of transplantation into the subretinal space[M]. Acta Anat (Basel), Jan 1998; 162(2-3): 178-83 〔2〕Sun D, Enzmann V, Lei S et al. Retinal pigment epithelial cells activate uveitogenic T cells when they express high levels of MHC class II molecules, but inhibit T cell activation when they express restricted levels[J]. J Neuroimmunol. 2003 Nov;144(1-2):1-8. 〔3〕Enzmann V, Hollborn M, Wiedemann P et al. Molecular and cellular evidence for T-cell stimulation by allogeneic retinal pigment epithelium cells in vitro[J]. Graefes Arch Clin Exp Ophthalmol. 2001 Jul;239(6):445-51. 〔4〕Enzmann V, Stadler M, Wiedemann P et al. In-vitro methods to decr