深海热液区管状蠕虫ridgeiapiscesae中ricinb-lectin型结构域基因的 .pdf

第３３卷　第４期 应 用 海 洋 学 学 报 Ｖｏｌ３３，Ｎｏ４ 　２０１４年１１月 ＪｏｕｒｎａｌｏｆＡｐｐｌｉｅｄＯｃｅａｎｏｇｒａｐｈｙ Ｎｏｖ．，２０１４ 深海热液区管状蠕虫 Ｒｉｄｇｅｉａｐｉｓｃｅｓａｅ中 ＲｉｃｉｎＢｌｅｃｔｉｎ型结构域基因的克隆与表达 １ ２ １ 徐海鹏 ，阮灵伟 ，崔治中 （１．山东农业大学动物科技学院，山东 泰安２７１０１８；２．国家海洋局第三海洋研究所、 国家海洋局海洋生物遗传资源重点实验室，福建 厦门３６１００５） 作为一种重要的模式识别因子，凝集素在多个领域中均有着广泛的应用价值，因此，开发和利 摘要： 用新型凝集素将具有重要意义．本研究以生活在深海热液区极端环境条件下的管状蠕虫Ｒｉｄｇｅｉａ ｐｉｓｃｅｓａｅ为材料，首次从管状蠕虫中克隆获得ＲｉｃｉｎＢｌｅｃｔｉｎ基因ｒｇａｌ．序列分析表明，ＲＧＡＬ与已知 序列的相似性较低，其含有２个ＲｉｃｉｎＢｌｅｃｔｉｎ型结构域，并且该结构域具有该家族所特有的 三 β 叶草形三维结构．多方面的分析结果显示ＲＧＡＬ可能是一个新颖的凝集素蛋白．对ＲＧＡＬ进行了原 核重组表达，并对其复性条件进行了摸索优化，成功获得了其可溶性表达产物，为后续ＲＧＡＬ的生 物活性分析奠定了坚实的基础． 海洋生物学；凝集素；ＲｉｃｉｎＢｌｅｃｔｉｎ结构域；管状蠕虫Ｒｉｄｇｅｉａｐｉｓｃｅｓａｅ；克隆表达 关键词： ＤＯＩ：１０．３９６９／Ｊ．ＩＳＳＮ．２０９５４９７２．２０１４．０４．０１０ 中图分类号：Ｐ７３５ 文献标识码：Ａ 文章编号：２０９５４９７２（２０１４）０４０５２５０６ 　　凝集素（ｌｅｃｔｉｎ）是自然界广泛存在的一类对糖 析表明Ｂ链上至少含有３个半乳糖结合位点，能 蛋白上的糖类具有高度特异结合活性的蛋白．根据 ［１０］ 特异识别细胞表面含半乳糖的糖蛋白或糖脂 ， 来源，凝集素可分为植物凝集素、动物凝集素和微 使蓖麻毒蛋白定位于细胞表面，进而通过内吞作 生物凝集素等．动物凝集素广泛分布于线虫、海绵 用介导Ａ链进入胞内发挥作用［１１１２］．具有凝集活 到哺乳动物等各种动物体内，在细胞生长、细胞凋 性的Ｂ链在结构上含有 ＲｉｃｉｎＢｌｅｃｔｉｎ结构域，在 亡、肿瘤转移、生物标记等许多生理和病理过程中 已发现的一些凝集素中也发现了相似的结构域． ［１４］ 均发挥着重要的作用 ． Ｌａｕｒｅ等（２００１）从立枯丝核菌中分离到的Ｎ乙酰 １９世纪６０年代，Ｓｔｉｌｌｍａｒｋ首次从蓖麻籽中分 半乳糖胺／半乳糖（ＧａｌＮＡｃ／Ｇａｌ）特异性的凝集素 离获得一种对红细胞具有强烈凝集活性的蛋白， ［１３］ 含有一个类似ＲｉｃｉｎＢｌｅｃｔｉｎ型结构域 ．Ｍａｓａｈｉｒｏ ［５］ 命名为蓖麻毒蛋白（Ｒｉｃｉｎ） ．此后，蓖麻毒蛋白 等（１９９９）从海洋无脊椎动物刺瓜参中纯化到 所具有的特殊的理化性质和生物学特性引起许多 ＧＡＬＩＩＩ凝集素，在其氨基酸Ｎ端发现有与蓖麻毒 研究人员的浓厚兴趣和广泛关注．蓖麻