嗅鞘细胞分离培养2.docVIP

嗅鞘细胞分离培养 嗅鞘细胞分离有传统分离法： 1. 显微解剖分离嗅球； 2. 嗅球置于少量ACSF（人工脑脊液）中(4℃冰浴)，在解剖显微镜下，将位于嗅球最外层的嗅神经层、嗅神经及包被的脑膜轻轻剥下，用ACSF洗2次；（用ACSF浸泡组织块，常温放置(室温低于26℃时采用)或4℃放置(室温高于26℃时采用)不超过2h） 3. 组织块用ACSF洗涤两遍：向装有组织块的EP管加入1ml含2*P/S 的ACSF，小心移除ACSF， 再次加入1ml含2*P/S 的ACSF，小心彻底移除ACSF； 4. 加入组织块5倍体积0.125%胰酶(用基础DMEM稀释)，用小剪刀把组织块尽量剪碎，用封口膜封口后，置于37℃水浴锅中, 孵育20min，每隔5 min弹匀一次； 5. 孵育结束后，立即加入1ML完全培养基（DMEM,10%FBS）, 立即混匀，1000g，室温，离心10min，小心移除上清；立即加入0.5 ML完全培养基（DMEM,10%FBS）重悬细胞及组织，吹打12下，把细胞及组织悬液放置于24孔板中，补加培养基至总体积为1.5ml。 分层消化法： 1. 显微解剖分离嗅球；（用ACSF浸泡组织块，常温放置(室温低于26℃时采用)或4℃放置(室温高于26℃时采用)不超过2h） 2. 嗅球用ACSF洗涤两遍：向装有嗅球的EP管加入1ml含2*P/S 的ACSF，小心移除ACSF， 再次加