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徐州市东方人民医院检验科 免疫室作业指导书 文件编号：XZDF-3-MY-02 版本/修订号：A/0 主题内容 三碘甲腺原氨酸定量测定 第1 页 共17 页 三碘甲腺原氨酸标准操作流程 1 目的 明确三碘甲腺原氨酸检测的操作规程，指导检验人员正确进行三碘甲腺原氨酸的检测。 2.适用范围： 2.1适用于T3检测的检验人员。 2.2适合仪器：Roche Modular E170/E601 ECL2010/e411 2.3适用试剂: Roche T3 e411/ECL2010/E170/E601 3方法原理： 采用竞争法原理 · 第1步：30μl标本、钌标记的抗T3抗体和ANS，后者释放结合的T3。 · 第2步：加入链霉亲和素包被的微粒和生物素化的T3。后者占据标记抗体上仍然游离的结合位点，形成抗体-半抗原复合物。形成的免疫复合物通过生物素、链酶亲和素之间的反应结合到微粒上。 · 第3步：反应混和液吸到测量池中，微粒通过磁铁吸附到电极上，未结合的物质被清洗液洗去，电极加电压后产生化学发光，通过光电倍增管进行测定。 ·检测结果由机器自动从标准曲线上查出。此曲线由仪器通过2点定标校正，由从试剂条形码扫描入仪器的原版标准曲线而得。 4临床应用 T3是甲状腺激素对各种靶器官作用的主要激素。T3（3、5、3-三碘酪氨酸）主要在甲状腺以外，尤其是在肝脏由T4经酶解脱去5‘位碘生成。因此，血清T3浓度反映出甲状腺对周边组织的功能甚于反映甲状腺分泌状态。T4转变成T3的减少会导致T3浓度的下降。见于药物的影响，如丙醇、糖皮质类固醇、胺碘酮以及严重的非甲状腺疾病（NTI），称为T3低下综合征。与T4一样，99%以上的T3与运输蛋白质结合，但T3的亲和力要低10倍左右。T3测定可用于T3-甲亢的诊断，早期甲亢的查明和假性甲状腺毒症的诊断。 5样品要求： 血清：按标准常规方法采集。 血浆：肝素锂、钠、铵；EDTA-K3；柠檬酸钠；氟化钠/草酸钾抗凝均可。标本在2－8度可稳定7天，-20度至少可稳定1个月。只能冻融一次。含沉淀的标本使用前需离心。不要加热灭活标本。 6 定标 每批T3试剂有一条形码标签，含有该批试剂定标所需的特殊信息。应用Elecsys T3定标液定标。 定标频率：每批试剂必须用新鲜试剂（试剂经仪器注册24小时以内）标定一次，如再次标定即根据下列要求： E170/E601/Elecsys2010/e411： · 一个月（同一批号试剂） 徐州市东方人民医院检验科 免疫室作业指导书 文件编号：XZDF-3-MY-02 版本/修订号：A/0 主题内容 三碘甲腺原氨酸定量测定 第 2 页 共17 页 · 7天（放置仪器上的同一试剂盒） 7 质控 Elecsys通用质控品1 (罗氏正常值质控) Elecsys通用质控品2 (罗氏病理值质控) 质控1和质控2至少每24小时或每一次定标后测定一次。质控间隔期应适用于实验室的具体要求。检测值应落在确定的范围内，如出现质控值落在范围以外，应采取校正措施。 8试剂准备及稳定期 M：链霉亲和素包被的微粒（透明瓶盖），1瓶，12ml。粒子浓度0.72mg/ml，生物素结合能力： 470ng生物素/mg粒子。含防腐剂。 R1：钌标记的羊抗T3多克隆抗体（灰盖），1瓶，16ml。浓度75ng/ml，ANS 0.08 mg/ml，磷酸缓冲液0.1mol/l，pH7.4。含防腐剂。 R2：生物素化的T3（黑盖），1瓶，16ml。生物素化的T3浓度3 ng/ml，ANS 0.8 mg/ml，磷酸缓冲液0.1mol/l，pH7.4。含防腐剂。 未打开的试剂盒：2－8℃至效期末。 开封后，2－8 度12周；放在E170/E601 Elecsys2010/e411上，8周； 9实验程序 按Roche Modular E170/E601 ECL2010/e411标准操作流程严格进行。 10抗干扰能力 该方法不受黄疸（胆红素35mg/dl）、溶血（血红蛋白2.0g/dl）、脂血（脂质1800mg/dl）生物素20ng/ml等干扰。接受高剂量生物素（5mg/天）治疗的病人，至少要等最后一次摄入生物素8小时后才能采血。不受类风湿因子干扰（1500U/ml）,来自透析病人的标本也无干扰。26种常用药物经试验对本测定无干扰。Amiodarone治疗可降低T3含量。苯妥英、保泰松和水杨酸盐可使T3从结合蛋白质中释放出来，从而导致总T3水平下降而游离T3水平正常。 本试验受甲状腺激素自身抗体的干扰。结合蛋白质（TBG、白蛋白）浓度异常（如NTI病人、怀孕、口服避孕药等）可使总T3水平不正常，尽管甲状腺功能正常。在患病非常严重的一般病人中，偶尔会出现与T3 不同的检测结果。对这样的病例，建议做游离T3