硫化镉纳米粒子标记寡核苷酸探针阳极溶出法检测NOS序列论文.pdfVIP

第26卷增刊 分析试验室 Y01．26．S．ppl． 2007年10月ChineseJoumalofAhalvsisI^boratory 2007一】O 硫化镉纳米粒子标记寡核苷酸探针阳极 溶出法检测NOS序列 钟江华，孙伟·，焦奎 (青岛科技大学化学与分子工程学院，青岛266042) 纳米粒子标记DNA电化学检测是利用纳米粒 多次后再分散于少量PBS中，得到CdS纳米粒子 子标记寡核苷酸作为探针，与目标DNA杂交后， 标记的ssDNA。将预处理好的金电极浸入10．O 在一定条件下检测纳米粒子或者溶出金属离子的 mnml／L巯基乙醇溶液中，室温下避光自组装12h， 电化学信号，间接测定DNA。将纳米粒子引入到 取出后得到巯基乙醇自组装膜修饰的金电极。将 mmol／L DNA的电化学检测中，可以显著提高检测的灵敏 SAM／Au电极浸入含5．0 EDC和目标序列 度，降低检出限【l。]。 的MES缓冲液中25℃保持18h，取出电极用大量 本文利用水相合成巯基乙酸修饰的CdS纳米 PBS冲洗3 粒子做为标记物用于转基因植物常见序列NOS终 饰金电极。将固定了目标序列的金电极放入含有 止子序列片断的电化学检测。在活化剂的作用下， CdS纳米粒子的ssDNA溶液中，40℃水浴中反应 40 纳米粒子表面的羧基可以与探针ssDNA序列一端 rain后用含0．1％SDS的PBS浸泡并冲洗电极， 修饰的氨基偶联，实现纳米粒子对探针序列的标 除去未杂交的探针序列。用150止1．0mol／L删03 记。在一定条件下，纳米粒子标记的探针序列与 溶解电极表面的CdS纳米粒子，将所得溶液移至2 mL0．1mol／L mol／L 固定在巯基乙醇自组装金电极上的目标序列发生 mCl溶液中(含2．7×10。4 杂交反应，利用强酸溶解杂交产物中的CdS纳米 H孑+)。以玻碳电极为工作电极，采用同位镀汞阳 粒子，以同位镀汞阳极溶出伏安法检测Cd2+离子极溶出法测定释放出的Ccl2+离子，沉积时间300 的电化学信号，进而间接完成对目标序列的电化 8，沉积电位一1．2V，以一0．84V处阳极溶出峰为 学定性定量检测。 测量信号。 实验采用CI-I]840B电化学工作站(上海辰华 将一系列不同浓度的目标序列固定在金电极 仪器公司)；常规三电极系统，工作电极为玻碳电 上，依照实验步骤进行检测。结果表明，随目标序 极，对电极为铂丝电极，参比电极为银／氯化银电 列浓度增大，溶出信号逐渐增大，对NoS目标序 极。目标序列为人工合成的NOS启动子基因序列 列检测的线性范围为8．0×10～一4．0×10’9 片断，所用试剂如巯基乙酸、巯基乙醇、1．乙基．3． (3．二甲基氨基丙基)碳二亚胺(EDC)、N．羟基琥 珀酰亚胺(NHS)以及2．(N一吗啉代)乙烷磺酸 (胍S)等均为分析纯。 面未固定DNA)及对相同浓度的三碱基错配、非互 实验方法如下：参照文献H1合成了巯基乙酸 补和目标序列进行检测得到的溶出信号。在空白 mL 修饰的CdS纳米溶胶，取5CdS纳米溶胶离心 试验中得到了较小的溶出信号，这可能是因为纳 mmol／L 米粒子与电极表面的非特异性吸附造成的；非互 纯化后水洗后加入100皿50 EDC、100止 50rmol／L NI-IS及探针序列，室温下搅拌18