稳定表达TMEM16A蛋白TE-1细胞株的构建与鉴定论文.pdfVIP

第30卷第1期 医 学 研 究 与 教 育 V_0l_30No．1 20l3年 2月 MedicalResearchandEducation Feb．，2013 稳定表达TMEM16A蛋白TE一1细胞株的构建与鉴定 耿仙’。冯承保 ，吴建民。，杨会茹 ，宋新梅 (1．河北大学基础医学院药理教研室，河北 保定 071002；2．保定市第二医院肿瘤科，河北 保定 071002；3．新乐市医 院外科，河北 新乐 050700；4．新乐市医院儿科，河北 新乐 050700) 摘要：目的建立稳定表达TMEM16A蛋白的TE—l肿瘤细胞株。方法用LipofectamineTM2000转染试剂将TMEM16A基因转 染到TE一1细胞，经G418筛选，使用激光共聚焦显微镜和Westernblot技术检~JITMEM16A基因是否在TE一1细胞中已经稳定表 达。结果通过使用G418进行筛选，阳性克隆于4周后培养形成。激光共聚焦显微镜观察稳定表达TMEM16A蛋白的TE—l细 胞可见细胞发出绿色荧光。Westernblot结果表明，未稳转细胞和稳转细胞系统均表达有TMEM16A蛋白，而稳转细胞系统 的蛋白水平明显高于未转染细胞系统的蛋白水平。结论 利用脂质体转染方法成功构建了稳定表达TMEM16A基因的TE一1 细胞系。 关键词：TMEM16A；TE一1；脂质体2000；激光共聚焦显微镜；免疫印迹 中图分类号：R735．1 文献标志码 ：A 文章编号：1674—490X(2013)01—0015-05 TransfectionofTMEM 16A goneintoTE-1cellsstablybyliposomeanditsidentification GENG Xian，FENGChengbao，WU Jianmin，YANGHuiru4SONG Xinmei ， f1．DepartmentofPharmacology,CollegeofBasicMedicicalScienceofHebeiUniversity,Baoding071002。 China；2．DepartmentofPhymatoloyg,NO．2HospitalofBaoding,Baoding071002,China,3．Departmentof Surgery,XinleHospital,Xinle050700,China；4．DepartmentofPediat~,XinleHospita,lA~nle050700,China) Abstract：0bjectiveTogetstablyexpressingTMEM16AproteinsbytransfectingTE-1cells．Methods TMEM 16A genewastransfectedintoTE一1cellsbyLipofectamineTM2000，thenwepickedup cellclonesin thepresenceofG418．TMEM 16A proteinswereidentifiedbyconfocalmicroscopeandwesternblot．Results After4weeks，htecellclonesofcolony-likeformedafterG418screening．ThestableTMEM 16A—expression TE-lcelllineswereobservedbyconfocalmicroscopeshowingsignalofGFPCO—transfected．Westernblot resultsshowedthatTMEM 16A proteinexpressedincontrolandstableTMEM 16A—expressionTE-1cells，and theexpressionwassignificantlyincreasedinTMEM 16A stablecelllines．Conclusion StableTMEM 16A— expressionTE-1celllinesarecreatedwiht liposomemethodsuccessfully． Keywords：TMEM 16A；TE-1