11重组体在真核细胞中的表达与调控.pptVIP

真核表达系统 酵母 丝状真菌 昆虫 哺乳动物细胞 转基因动物 植物反应器 酵母表达系统的优缺点 遗传背景清楚（基因组是大肠杆菌的3.5倍） 增殖快（90min/代），培养容易，产量较高 易于研究突变与基因功能，如构建酵母人工染色体等 可以进行转录和翻译后修饰加工 提纯工艺复杂，成本高，制品纯度达不到要求，制品免疫原性差，接种剂量大 酵母载体的基本结构 DNA复制起始区：2μ质粒和自主复制序列 选择标记：营养缺陷型和显性选择（抗药） 整合介导区：同源重组，决定整合位置和拷贝数 有丝分裂稳定区：帮助载体平均分配 表达盒 转录启动子 终止子 分泌信号序列 酵母表达系统中载体的种类 按载体在酵母中的复制形式分为： YIp：酵母整合型载体 YRp：酵母自主复制型载体 YCp：酵母含着丝粒片段载体 YEp：酵母附加体型载体 YAC：酵母人工染色体 昆虫表达系统 杆状病毒基因组：闭环双链DNA，88-166kb 启动子：杆状病毒科核多角体病毒的多角蛋白强启动子 表达系统 杆状病毒表达系统（BEVS） 家蚕核型多角体病毒-家蚕表达系统 宿主：鳞翅目、膜翅目、双翅目、鞘翅目、直翅目、脉翅目、毛翅目的600多种昆虫 克隆基因方法：转移载体→共转染→同源重组→空斑筛选→纯化→重组病毒 杆状病毒表达系统优点 容量大：能插入12kb的外源基因 高表达：polh基因启动子是目前所知的最强的真核启动子；产物对宿