植物细胞培养概要1.pptVIP

第三章动植物细胞培养产酶之植物 1、从现成植物材料中提取酶的一般步骤 提取分离法 采集植物 植物细胞培养在产酶方面的应用 总结：植物细胞突出特点 生产周期长、 生长和代谢需要一定的光照 对剪切力敏感、 二、植物细胞培养的特点 相比从植物原材料中提取 1）提高产率 2）缩短周期 3）易于管理、减轻劳动强度 4）提高产品质量 5）其他，如不受季节、生物资源限制 三、植物细胞培养的工艺条件及控制 一）植物细胞培养的工艺流程 外植体的选择和处理→愈伤组织的诱导→细胞的获取→细胞培养→分离纯化→产物 选择外植体、切取片段、消毒处理，诱导培养生成愈伤组织，分离细胞后过滤、离心得到能迅速增殖、无特定结构功能的薄壁细胞团，振荡培养分离得到单细胞后悬浮培养，最后再大规模培养 外植体和愈伤组织 3）原生质体再生法分离细胞 原生质体分离方法也有机械分离法和酶解法这两种。 分离时要用渗透压保护剂 哪些渗透压保护剂？ 形成细胞悬液 3）原生质体再生法分离细胞 原生质体分离方法也有机械分离法和酶解法这两种。 分离时要用渗透压保护剂 蔗糖、葡萄糖、盐类溶液 形成细胞悬液 悬浮培养特点 培养基体积固定 培养过程中，细胞生长，其数目不断发生变化，呈S型增长。 必须适当搅拌 最后，分离纯化、提取 二） 植物细胞培养的培养基 二）植物细胞培养的培养基 培养基 植物细胞培养基 植物细胞培养基 相关知识 激素的影响1 激素的影响2 常用植物细胞培养基 常用植物细胞培养基 常用植物细胞培养基 3. 植物细胞培养基的配制 三） 培养温度和pH等条件 温度：适宜温度20-25℃，酶合成温度因植物种类而异 pH: 植物细胞培养要求稳定pH，一般pH5.8-6.1最好 植物细胞培养过程中pH变化不大 溶氧、通气搅拌: 细胞比较大，较脆弱，对剪切力敏感，且耗氧速率较慢，所以通气和搅拌不要太强烈 光照：对一些植物酶有诱导作用或抑制作用。 刺激物：在酶合成时期，适当添加。 前体的添加：对一些植物酶有诱导作用。如苯丙氨酸 刺激物：在酶合成时期，适当添加。微生物细胞碎片 细胞壁碎片、酵母葡聚糖、果胶酶、纤维素酶、 植物细胞培养相关知识 二、相关知识 总结：植物细胞培养产酶 植物细胞培养工艺 植物细胞培养成新植株 三、植物细胞全能性 操作步骤 操作步骤 切开胡萝卜，在圆圈处取一块组织 P-木质部、C-形成层、X-韧皮部 操作步骤 形成层开始形成愈伤组织 C1-愈伤组织、C2-形成层 操作步骤 3-4周后完全形成愈伤组织状态（脱分化） 组织块失去色素 操作步骤 把脱分化后的愈伤组织转移到培养基上 操作步骤 两周左右开始再分化，长出幼苗 操作步骤 将幼苗移植到外部条件下培养（顺化） 五、操作步骤 顺化一个月后的胡萝卜植株 常用培养基简介— 1）MS培养基 1962年由Murashige和Skoog为培养烟草细胞而设计的。特点是无机盐和离子浓度较高，为较稳定的平衡溶液。其养分的数量和比例较合适，可满足植物的营养和生理需要。它的硝酸盐含量较其他培养基为高，广泛地用于植物的器官、花药、细胞和原生质体培养，效果良好。有些培养基是由它演变而来的。 MS培养基配制方法 不同营养条件对植物组织培养的影响 生长良好的愈伤组织 无蔗糖 蔗糖浓度只有1% 蔗糖浓度有5% The explant is completely covered with green shoots, and roots are developing on the lower surface Very few shoots have developed on the explant. No roots and no callus愈伤组织. Shoots developed on edges of upper surface, and some root development has occured Shoots have developed over the surface of the explant, along with roots from the lower surface. The result is comparable with the control medium No MS salts No sign of regeneration from explant at all.? MS salts reduced to 0.47 g. l-1 ? Some root growth but reduced development of shoots MS salts in