一种适用于木本植物RNA提取的方法.pdfVIP

42 安徽农学通报，Anhui Agn．Sci．Bul1．2007，13(23) 一 种适用于木本植物RNA提取的方法 李晓毓 赵德刚 李丰伯 (1贵州大学农业生物工程省级重点实验室，贵州贵阳 550025；2黄山学院生命与环境科学学院，安徽黄山 245041) 摘 要：木本植物富含酚类、多糖等代谢物质，用普通方法提取RNA时很难将其除去。选取杜仲叶片做材料，通过比 较研究Trizol、改良CTAB法和热硼酸盐法三种RNA提取方法，发现改良CTAB法提取效果好且简单易行，单位鲜重 材料获得的RNA产量高，电泳务带清晰完整，OD26o／OD 。=1．84，是一种适于木本植物RNA提取的方法。 关键词：木本植物；杜仲；RNA提取 中图分类号 0657 文献标识码 B 文章编号 1007—7731(2007)23—42—01 高质量RNA的获得是开展分子生物学研究的必要前 30min，沉淀以75％乙醇洗涤，干燥后溶于适量的Rnase— 提，由于RNA不稳定、易降解，提取的RNA质量不好，在 free水中，一70℃保存。 反转录时往往无法合成cDNA或是合成的cDNA链长短 2．3 热硼酸盐法 取3g样品，加人10％样品重的多聚聚 不一，给研究带来很多的不便。因此从植物组织中提取纯 乙烯吡咯烷酮，液氮研磨成细粉状，加人装有2Oml提取缓 度高、完整性好的RNA尤为重要。一般来说，草本植物细 冲液(0，2M四硼酸钠、30mM EDTA、1％SDS、1％脱氧胆酸 胞内成分简单，较易提取纯度高的RNA；而有些木本植物 钠盐)的离心管中，再加人0．0309g二硫苏糖，置于80℃下 富含酚类、多糖等次生代谢物质，这些物质在提取RNA时 平衡15min。将样品加人热平衡后的提取缓冲液，振荡混 很难将其去除，所得的RNA往往纯度很低，严重影响后续 匀，42℃摇床上提取1．5h。之后，向样品管中加人1，6ml 的操作。 2M KC1，混匀后4℃放置 1h，以12000rpm离心20min。取 杜仲(Eucommia ulmoides Olive)是一种名贵的经济植 上清液置于新管中，加人1／4体积8M LiCL，混匀后4~C放 物，其细胞内成分复杂，不仅含有酚类、多糖等次生代谢物 置过夜。以12000rpm离心20min，去除上清液，RNA沉淀 质，整个植株还布满胶丝——杜仲胶，这些物质的存在给 滞留于管底。加人3—5ml预冷的2M LiCL，重复清洗 提取纯度高、完整性好的RNA带来许多不便。酚类物质 RNA沉淀直到无色素类物质。加2ml Tris—HC1(10mM， 在细胞破碎后很容易被氧化为棕红的醌，然后和核酸不可 pH7．5)溶解沉淀，4~C下以12000rpm离心10min，去除不 逆的结合，从而引起核酸的降解或形成较难溶于水的沉 溶性的沉淀，将上清液转移至新管。加人200ul(1／10体 淀。多糖的很多理化性质也和核酸相似，往往在去除多糖 积)的2 M醋酸钾(pH5．5)，温浴 30min，4~C下以 时也会带走部分的RNA，造成产量的减少。本研究试图 12000rpm离心10min。将上清液转移至新管，加人2．5s倍 以杜仲为材料，探索一种适用于富含多糖多酚的木本植物 体积的无水乙醇，混匀并置于一80℃沉降RNA1—2h。4~C RNA提取的方法。 离心，去除上清液，RNA沉淀留于管底。用70％冷乙醇清 洗沉淀，室温干燥后用200ul超纯水溶解沉淀并转移至 l 材料 1．5ml离心管中，