基因工程公开课概要1.ppt

* 本资料来自于资源最齐全的２１世纪教育网 * 基因工程的原理 探究1、基因工程的概念辨析 基因工程的别名 操作环境 操作对象 操作水平 基本过程 结果 生物体外 基因 DNA分子水平 剪切→拼接→导入→表达 人类需要的基因产物 基因拼接技术或DNA重组技术 1．(2010·全国Ⅱ，5)下列叙述符合基因工程概念的是 A．B淋巴细胞与肿瘤细胞融合，杂交瘤细胞中含有B淋巴细胞中的抗体基因 B．将人的干扰素基因重组到质粒后导入大肠杆菌，获得能产生人干 扰素的菌株 C．用紫外线照射青霉菌，使其DNA发生改变，通过筛选获得青霉素高产菌株 D．自然界中天然存在的噬菌体自行感染细菌后其DNA整合到细菌DNA上 答案：B 黏性末端 黏性末端 EcoRI 二、基因工程的工具——限制性内切酶 如果把两种来源不同的DNA用同一种限制酶来切割，会怎样呢？ 会产生相同的黏性末端，然后让两者的黏性末端黏合起来，就似乎可以合成重组的DNA分子了。 基因的缝纫针——DNA连接酶 DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来(形成磷酸二酯键)，这样一个重组的DNA分子就形成了。 基因的缝纫针：DNA连接酶 G A A T T C C T T A A G G A A T T C C T T A A G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G G C T T A A A A T T C G 同种限制酶切割 探究2：几种酶的比较 比较项目 限制性内切酶 DNA连接酶 DNA聚合酶 解旋酶 作用底物 作用部位 作用结果 DNA分子 DNA分子片段 脱氧核苷酸 DNA分子 磷酸二酯键 磷酸二酯键 磷酸二酯键 碱基对间的氢键 形成粘性末端或平末端 形成重组DNA分子 形成新的DNA分子 形成单链DNA分子 下图为DNA分子在不同酶的作用下所发生的变化，依次表示何种酶的作用。 A____________,B______________,C__________,D__________ 限制性内切酶 DNA连接酶 解旋酶 DNA聚合酶 基因的运输工具——运载体 常用的运载体有： 质粒 噬菌体 动植物的病毒 基因工程的“运输专用工具” 质粒特点： 1、细菌拟核外双链环状DNA分子 2、能自我复制并在受体细胞中稳定存在 3、有一个或多个限制酶切点 4、有特殊的遗传标记基因 注意：真正用作运载体的质粒都 是人工改造过的。 探究3.作为运载体必须具备哪些条件？ 1）能够在宿主细胞中复制并稳定地保存。 2）具多个限制酶切点，以便与多种外源基因连接。 3）具有某些标记基因，便于进行筛选。 如抗菌素的抗性基因、产物具有颜色反应的基因等 4）对宿主细胞无害。 三 基因工程的基本操作程序 1）目的基因的获取 2）目的基因与运载体结合 3）将目的基因导入受体细胞 4）目的基因的检测与鉴定 基因工程的基本操作程序 四个基本步骤： 目的基因 目的基因是人们所需要转移或改造的基因。 如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。 步骤一：目的基因的获取 目的基因的提取方法 直接分离基因 人工合成基因 逆转录法 根据已知的氨基酸序列合成DNA ：鸟枪法 在获取真核细胞中的目的基因时,一般用人工合成基因的方法. 质粒 目的基因 限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 重组载体 同一种 过程: 步骤二：目的基因与运载体结合 启动子 终止子 目的基因 标记基因 目的基因与运载体结合 目的：是使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一代 (核心） 基因表达载体的组成： a、目的基因 b、启动子 c、终止子 d、标记基因 位于基因的首端,是RNA聚合酶结合位点 位于基因的末端,终止转录 检测目的基因是否导入受体细胞 常用的受体细胞： 动植物细胞、大肠杆菌、土壤农杆菌、枯草杆菌等。 将目的基因导入受体细胞的原理： 借鉴细菌或病毒侵染细胞的途径。 步骤三：将目的基因导入受体细胞 1、如果受体细胞是动物细胞，一般常用什么类型细胞？为什么？ 受精卵细胞 ，受精卵的全能性最高，能发育成一个新个体。 2、为什么基因工程常采用原核生物作为受体细胞？ 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 想一想： 方