分离和冷冻处理对牛性控精液线粒体膜电位的影响.pdfVIP

and 20]0筇第46卷第1期 鬟鞠生理·ReproductionPhysiology 分离和冷冻处理对 牛性控精液线粒体膜电位的影H向 吴治晴，，秦应和r，李喜和2 (1．中国农业大学动物科技学院，北京100193； 2，内蒙古蒙牛繁育生物技术有限公司，内蒙古呼和浩特011517) 摘要：采用Ic一1染色结合流式细胞仪和激光共聚焦显微镜，分别对4组牛精液样品(鲜精、分离精液、普通冻 精和分离冻精)的线粒体膜电位进行检测，研究分离和冷冻处理对牛精子线粒体膜电位的影响。结果表明：分离处 后，A、B和C种公牛的线粒体膜电位均显著变化(Po．05)；且鲜精时线粒体膜电位无显著差异的A和B种公 牛，分离后线粒体膜电位出现显著差异(Po．05o当精液从采集到处理的间隔时间在24h以内时，分离处理后 精子线粒体膜电位无显著性变化(Po．05)，但同样时间间隔内冷冻处理后，精子线粒体膜电位显著变化(P o．05)。实验表明和分离处理相比，冷冻处理对精子线粒体膜电位的影响更为显著，且不同种公牛对分离和冷冻处 理的耐受性不同。 关键词：分离；冷冻；线粒体膜电位；牛 中图分类号：$823．3 文献标识码：A 美国XY公司首次将流式细胞仪成功应用于兔 子的供能中心，能够不断产生精子运动所需要的 XY精子分离，并达到较高的准确度111。此后，经过不ATP，若精子细胞受到损伤可引起线粒体膜电位 断的技术研发与设备改进，精子分离速度及准确度 (A1l，m)崩解，最终影响精子的受精能力I引。 都在逐年提高。2000年，该技术开始在困外步人商 因此，本实验旨在通过使用荧光染料JC一1结合 业化应用。但是性控精液与普通精液相比，其实际 流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测性控精液生产 应用效果还不十分令人满意。研究表明，性控精液 过程中分离和冷冻处理对牛精子线粒体膜电位的影 输精后的妊娠率约为对照组的70％一80％，妊娠后响，并比较不同种公牛之间以及不同的处理时间间 1。2个月的流产率，比对照组高1％一2％【翻。 隔这种影响的具体差别，从而为优化精子分离程序、 对造成这些结果的原因，国内、外学者做了大量 完善待处理过程以及进一步研究精子在分离过程中 研究，主要是通过检测分离和冷冻处理对精子活力、 所受损伤的机理提供参考。 质膜完整性、顶体状态、DNA完整性、线粒体活性、 1材料与方法 获能状态等指标的变化情况进行分析。但就目前来 说，导致性控冻精受胎效果降低的根本原因，仍未有 1．1 精液采集及分组 用假阴道法采集荷斯坦种 明确的解释。这种情况下，与精子受精能力相关性 公牛(北京奶牛中心)的精液，相差显微镜评估精子 的活率和形态正常率，选择活率≥70％，形态正常 最强的指标受到了更多关注。Marchetti等f31研究认 为，相比于精液常规参数、活性氧(ROS)产生以及率≥75％的精液。实验分为4组，即鲜精组、普通冻 DNA完整性等指标，通过检测线粒体膜电位来评价 精组、分离精液组和分离冻精组，精液冷冻处理采用 精子质量会更有代表性。有研究显示，线粒体是精 Schenk等151所述的冷冻方法进行。 1．2实验材料Hoechst 收稿日期：2009—1l一25；修回日期：2009—12-22 基金项目：围家科技支撑计划项目(2006BAD04A02—10) 作者简介：吴治晴(1983一)，女，江西鹰潭人，硕士 自南京凯基生物科技发展有限公司；仪器主要有 t通讯作者 嘲》中固亳牧杂志 2010年第46卷第1期