ER、PR和p53基因检测及DNA倍体分析对结直.docVIP

　　ER、PR和p53基因检测及DNA倍体分析对结直 【摘要】 目的 探讨ER、PR表达和p53基因检测及DNA倍体对结直肠癌预后判断的意义。方法 采用RBA 法、免疫组织化学方法和流式细胞术对286例结直肠癌标本分别进行ER、PR表达和p53基因检测及DNA倍体分析并结合患者的临床资料进行分析。结果 ER、PR表达和p53基因检测及DNA倍体分析与结直肠癌患者预后均有明显相关，差异有极显著性意义（Plt;0.01）。DNA二倍体、p53基因检测和ER、PR的表达水平越强其患者预后越好。结论 结直肠癌ER、PR表达和p53基因检测及DNA倍体分析有助于结直肠癌患者的临床诊断及预后评估。 【关键词】 结直肠癌;ER;PR;p53;DNA倍体;预后 [Abstract] Objective To investigate the significance of detection of estrogen receptor(ER), progesterone receptor (PR), p53 gene and DNA ploidy analysis to prognostic judgment of colorectal cancer. Methods ER, PR, P53 gene and DNA ploidy ined by radiobioassay (RBA), immunohistochemistry, floetry in 286 specimens of colorectal cancer. Results The expressions of ER, PR, P53 gene and DNA ploidy correlated ent of colorectal cancer. [Key ×1 cm×1 cm大小的肿瘤组织，另在距肿瘤约10 cm的部位取约1 cm×1 cm×1 cm的结直肠黏膜组织（病理证实为正常组织），置于－4℃环境下保存，待检测。 1.2.2 试剂 配体：3H－雌二醇，活度3.19 TBq/mmoL，纯度gt;95%,(H－孕酮，活度2.80 TBq/mmoL，纯度gt;95%,Nein 4℃离心10 min ，其上清30000 r/min离心40 min后所得上清为胞浆，其内含胞浆受体蛋白；首次离心后的沉淀用STM 悬浮，细胞用尼龙网过滤，770 r/min离心10 min ，重复3 次，所得沉淀加STM 成胞核悬液，其内含胞核受体蛋白。 1.2.4 ER和PR的检测 胞浆及胞核ER和PR的测定均采用RBA法，样品用水浴（37℃）保温15 min ，胞浆受体分析采用Dcc(dextrancoated Charcoal technique）法（1％活性碳，0.1％葡聚糖，TEDGM缓冲液）。胞核受体采用滤膜法，滤膜采用3层9999型玻璃纤维滤纸（上海红光造纸厂）。滤膜烘干后用液体闪烁计数仪测量其放射性，将测得的总结合值减去非特异结合值即得特异结合值，蛋白浓度按LoL的细胞悬液，PI染色30 min，经300目尼龙网过滤后上机检测。用人外周血淋巴细胞作流式细胞仪的校准和外参。采用美国Coulter公司Profile Ⅱ型流式细胞仪，Muticycle专业软件分析结果，依据DNA指数(DI)判定肿瘤细胞倍性状态，DI=1.0±0.05为二倍体，超过此范围为异倍体。 1.2.7 统计学方法所有统计应用SPSS11.0统计软件统计。两组间差异应用t检验、多组间差异应用方差分析及两组间相关应用相关分析，相关分析用Spearmen相关分析。取P＜0.05 有统计学意义。 2 结 果 2.1 ER和PR在结直肠癌组织中的表达 ER和PR 主要在癌细胞核表达，ER和PR的表达随肿瘤浸润深度增加而减少，随肿瘤分化程度降低而减少。ER和PR的表达水平及其与临床和病理之间的关系见表1。表1 ER和PR的表达水平与临床、病理之间的关系 2.2 p53基因检测和ER和PR的表达与结直肠癌临床生物学行为和预后的关系 p53基因检测和ER和PR的表达结果显示，p53基因检测Dukes A期突变为12%、DukesB期突变为22%、Dukes C期突变为29%。p53基因检测和ER和PR 的表达水平与结直肠癌患者肿瘤部位、大体类型等无明显相关性（rlt;0.4,Pgt;0.05）,但与Dukes分期、组织学类型有关，Dukes分期越低，组织分化越低，p53基因检测率越低和ER和PR 的表达水平越低（rgt;0.56,Plt;0.01）有明显相关性。 2.3 结直肠癌DNA 倍体类型与病理分类的关系 286 例中Dukes A期DNA异倍体率明显低于C期（Plt;0.01)；高分化、中分化腺癌的异倍体率