Lewis全细胞肿瘤疫苗防治C57BL-6小鼠L.docVIP

　　Lewis全细胞肿瘤疫苗防治C57BL/6小鼠L 【摘要】 目的 探讨Leor formation and the efficacy of immune response of C57BL/6 mice after the mice orcell vaccine against Lea.Methods Tice (vaccine group and control group) es. EM）高糖完全培养液中。 　　1.1.3 试剂 完全弗氏佐剂，购于SIGMA公司。 　　1.2 方法 　　1.2.1 LLC肿瘤细胞悬液制备 取处于对数生长期的LLC细胞接种于C57BL/6小鼠右腋皮下，成瘤后于无菌条件下取局部肿瘤组织并称重，将瘤组织(g) 与生理盐水(mL) 以1∶10的比例混合成匀浆（计数板计数瘤细胞约为1×106/mL）。 　　1.2.2 疫苗组小鼠免疫 将处于对数生长期的LLC细胞，用2.5%胰酶消化后，重悬于含10%(φ)小牛血清的DMEM培养液中, DHANK’S液洗涤3遍，调整细胞数为2×107/mL,置室温和-20 ℃反复冻融5次以灭活细胞［4］。用2只注射器分别抽取完全弗氏佐剂与灭活细胞，体积比为1∶1,再用三通管将其连接，乳化30 min，作为疫苗组油剂疫苗。乳化效果以乳化液滴于水中2 h无扩散为标准。每只小鼠左前肢及左后肢各肌注疫苗50 μL，每周1次，共4次。第1次为含弗氏佐剂油剂疫苗，第2、3、4次为单纯灭活细胞+生理盐水水剂疫苗。第4次免疫时同时于小鼠右腋下接种LLC肿瘤细胞悬液0.2 mL。 　　1.2.3 对照组小鼠免疫 用2只注射器分别抽取完全弗氏佐剂与生理盐水，体积比为1∶1,再用三通管将其连接，乳化30 min，作为对照组油剂疫苗。乳化效果以乳化液滴于水中2 h无扩散为标准。每只小鼠左前肢及左后肢各肌注疫苗50 μL，每周1次，共4次。第1次为含完全弗氏佐剂油剂疫苗，第2、3、4次为单纯生理盐水。第4次免疫时同时于小鼠右腋下接种LLC肿瘤细胞悬液0.2 mL。 　　　 　　每日观察小鼠成瘤情况，记录成瘤时间，计算小鼠成瘤率。自接种第10日起，每2日直尺测量每只小鼠腋下肿瘤长径（L）和短径（W），用Still公式计算肿瘤体积,V=Leier法进行生存分析，两组间生存率差异显著性检验用Log rank 检验，以P＜0.05为差异有显著性。 　　2 结果 　　2.1 Leor formation after the inoculated munized C57BL/6 mice 　　*肿瘤体积为接种后第18天的测量结果 　　图1 两组小鼠的生存曲线图（KaplanMeier法）（略） 　　Fig.1 Survival functions of tethod） 　　2.2 小鼠外周血T、B淋巴细胞亚群检测结果 疫苗组小鼠与对照组小鼠相比其外周血的CD4+T细胞及CD8+T细胞之百分比无明显改变，差异无显著性，CD4+/ CD8+比值的变化差异也无显著性；疫苗组外周血中CD19+B淋巴细胞百分比高于对照组，差异有显著性（P=0.014）。提示Leice 　　图3 小鼠外周血中T、B淋巴细胞百分比（略） 　　Fig.3 Percentage of T cells and B cells in peripheral blood 　　3 讨论 　　随着对肿瘤免疫研究的深入，肿瘤免疫治疗已成为当今肿瘤治疗的研究热点之一。肿瘤细胞疫苗是肿瘤免疫治疗的一个重要组成部分［6］。人们认为可以通过肿瘤( 抗原) 疫苗来提高机体免疫系统对肿瘤的识别和排斥，进而达到抗肿瘤的作用。灭活的肿瘤细胞理论上能提供肿瘤细胞的所有抗原, 包括特异性抗原和广谱性抗原,用其免疫机体后可使使机体形成特异性抗肿瘤免疫应答［7］。通常采用在疫苗中加入诱导免疫反应的免疫佐剂，借此来达到增强疫苗免疫原性的目的［8］。 　　 　　齐旭［9］等应用完全弗氏佐剂及rhIL2+rmGMCSF混合肿瘤细胞制成自体肿瘤疫苗,对荷瘤小鼠进行主动免疫治疗，免疫组小鼠生存期较对照组显著延长。但是文中提到的对照组接种的免疫剂为Hank’s 平衡盐溶液，这一对照不能排除免疫组生存期的延长是由佐剂增强了机体的非特异性免疫所致。彭宝岗等［10］采用多聚甲醛固定的小鼠肝癌细胞混合粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和白介素2 缓释微球为免疫激活剂作为肿瘤疫苗, 接种小鼠后, 80 %小鼠获得保护，但同样不能证实其保护作用是由肿瘤疫苗引起的特异性免疫应答所致。 　　本实验中所用的完全弗氏佐剂是由矿物油、水及灭活的结核杆菌混合而成的油性乳剂。完全弗氏佐剂是Th1亚型细胞的强有力激活剂，能增强机体的细胞免疫和体液免疫反应,但是因其可引起组织坏死、溃疡等副作