水稻根cDNA文库中抗菌蛋白肽编码基因的筛选研究.pdfVIP

摘要 作为防御系统的一部分，生物(包括植物)产生各种化合物来防御病原物的入侵。 这些化合物包括蛋白和肽。鉴别并了解这些化合物及其在防御反应中的作用将可以更 好的研究生物抗病的机理。 然而，目前发现这些肽和蛋白及其编码基因的方法非常繁琐，包括蛋白提取、纯 化、生物实验和基因克隆等，从而限制了新的编码抗菌肽，蛋白(AMP)的基因发现。 本研究以微孔滤膜为支持介质，以菌体染色为鉴别手段，从eDNA文库中筛选可 能编码抗菌肽的基因，克隆基因后进行蛋白质的体外表达，进而开展抗菌活性的鉴定． 一步经过固体涂板验证、液体抑菌活性测定，确定其中57个为进一步验证的阳性克 些克隆分为四类：第1类是四种菌中染色都为蓝色的克隆：第Ⅱ类是三种菌中染色为 蓝色的克隆，依此类推。对阳性克隆进行5’端测序，然后进行BlastX分析，结果表 明有些序列编码已知的抗菌肽，如脂转移蛋白：有些序列编码抗性相关蛋白，如LEA 蛋白；有些序列编码的蛋白与细菌自身蛋白相似，可能对细菌的正常生理功能有干扰 作用；此外，我们还筛选获得了一些功能未知的克隆。 为了进一步鉴定这些克隆的功能，我们对部分筛选到的蛋白质编码基因克隆到了 la中，主要结果如下： 高表达载体pET32a、pET28a和pETI ER2566 (1)将脂转移蛋白编码基因亚克隆到表达载体pET32《+)中，在E．coli 中实现了表达； 中，在Ecoli 白； (3)将编码Group3LEA蛋白的基因亚克隆到表达载体pETlla中实现了表达。 关键词：抗菌肽；抗菌蛋白；抑菌活性；基因克隆；脂转移蛋白；LEA蛋白 Genes ScreeningAntimierobialproteins／peptidescoding fromRiceRootcDNA Library Candidate：WangHai-jiao andmolecular Specilty：．Biochemistrybiology LiuOao-zhcn Supervisor：．Professor Abstract As ofdefense various produce part system,livingorganisms，includudingplants antimicrobialtodefencothemselvesinvasionofmierobes．These compounds against included and others．Identificationand proteins compounds peptides，among ofthese andtheirroleindisease would mechanismfor compounds immunologyprovide better contr01． disease for ofthese and their However,cmTen