人肝癌组织中nm23H1基因突变的检测及意义.docVIP

　　人肝癌组织中nm23H1基因突变的检测及意义 【摘要】 目的 观察肿瘤转移抑制基因nm23H1在人原发性肝细胞癌中的突变情况,探讨nm23H1基因突变与肝癌发生、发展及转移的关系。方法 采用聚合酶链反应单链构象多态性技术(PCRSSCP)，对16例肝癌组织、12例癌旁组织和4例正常肝组织的nm23H1基因的第1、2、4外显子突变情况突变进行检测。结果 肝癌组织中有1例nm23H1基因第1外显子纯合缺失；肝癌组织中1例第1外显子、1例第2外显子，癌旁组织中2例第2外显子有单链DNA泳动变位。结论 nm23H1基因突变在肝癌组织中发生率低。 【关键词】 肝肿瘤 nm23H1基因 突变 聚合酶链反应 ［ABSTRACT］ObjectiveTo investigate the mutation of nm23H1 gene and to explore the relationship bet23H1 mutation and the development, progression and metastasis of human hepatocellular carcinoma （HCC）. MethodsMutations of the exon1,2,4 of nm23H1 gene in 16 HCC tissues, 12 adjacent liver tissues and four normal liver tissues ined by polymerase chain reactionsingle strand conformation polymorphism (PCRSSCP). ResultsOne of exon 1 homozygous loss of allele of nm23H1 gene obility shift of single strand DNA of nm23H1 ined including one of exon1 in HCC tissues, one of exon 2 in adjacent liver tissue and tutation of nm23H1 gene in HCC is los; nm23H1; mutation; polymerase chain reaction 原发性肝细胞癌(HCC)是消化系统常见的恶性肿瘤，目前还缺乏有效的治疗方法，肿瘤细胞转移是造成病人死亡的重要原因。近年来通过分子克隆技术发现一类参与调控肿瘤转移的基因，这类基因的失活、突变或表达异常，可导致肿瘤的转移，故称为转移抑制基因。已经发现的转移抑制基因包括nm23、TIMP和I等，其中尤以nm23基因与肿瘤转移的关系密切。nm23基因对肿瘤细胞转移潜能的抑制作用较明确，但对nm23基因抑制肿瘤转移的机制尚不清楚。临床研究发现，nm23基因缺失或表达降低与多种肿瘤的发生和转移关系密切，也有在部分肿瘤中未检测到nm23基因改变的报道［1］。近年来，国内外主要是通过免疫组织化学的方法检测nm23H1 mRNA的表达及蛋白产物(NDPK)的变化来研究nm23H1基因在肝癌转移中的作用，而对nm23H1基因突变的研究国内外报道较少。为探讨nm23H1基因在肝癌组织中的突变情况，本研究采用聚合酶链反应单链构象多态性技术(PCRSSCP)在基因水平对nm23H1基因第1、2、4外显子进行了突变分析。 1 材料和方法 1.1 组织标本 标本来自2004年1月～2005年8月青岛大学医学院附属医院肝胆外科手术病人。16例为肝细胞癌病人，其中男10例，女6例，年龄45～72岁。术中16例取癌区、12例取癌旁区（距癌边缘2～5 cm）组织标本。4例肝血管瘤病人，均为男性，年龄35～59岁，术中取正常肝组织标本。组织离体后放入-20 ℃冰箱冻存。病人诊断均符合1990年全国第6届病毒性肝炎学术会议修订的临床诊断标准，并经术后病理诊断证实。 1.2 组织DNA的提取 取米粒大小肝组织，使用上海生工生物工程公司基因组DNA提取试剂盒提取肝组织基因组DNA,-20 ℃冰箱冻存。 1.3 PCR引物合成 本文引物设计根据GenBank Database(ACCESSION X75598)提供的nm23H1基因全序列，参考BAFICO等［2］的方案，设计扩增nm23H1基因第1、2、4外显子的引物(表1)。由上海生工生物工程公司合成。表1 引物序列及扩增基因片段长度 1.4 PCR扩增 PCR反应体系包括：模板DNA 100 ng，每种引物各10 μmol/L，10 mmol/L dNTPs 2.5 μL，10×Buf