维甲酸诱导胎鼠颌面畸形的磁共振波谱初步探究-唇腭裂治疗中心.doc

维甲酸诱导胎鼠颌面畸形的磁共振波谱初步探究 秦菲菲 唐世杰 沈智威 吴仁华 张桂姗 彭立红 胡晓 摘要 磁共振波谱（magnetic resonance spectroscopy ,MRS ）是目前惟一能无创性观察活体组织代谢及器官发育过程和病理生理过程中代谢物的变化的技术，目前最常用的原子核是1H。颌面部的发生是一系列复杂过程，其研究主要集中在基因组学和蛋白组学方面。本实验旨在应用单体素磁共振波谱成像探讨在体胚胎颌面发育畸形代谢水平的变化。材料和方法：将昆明孕鼠分为四组，在怀孕第11 天分别以30、70、100mg/kg剂量的维甲酸，溶于2ml 芝麻油灌胃，对照组给以相同容积的介质。于怀孕14.5 天应用美国Agilent 7.0T 核磁共振仪，行孕鼠胚胎颌面部常规 MR扫描。扫描平面包括胎儿头部轴面、冠状面和矢状面。在胚胎头部三个正交平面定位的基础上以颌面部中心为兴趣区(VOI) 采用定点分辨波谱序列(PRESS) 行单体素1H-MRS 扫描。怀孕17.5 天体式显微镜及HE染色观察胚胎颌面部形态学变化。结果：70、100mg/kg剂量组维甲酸可诱导全部胎鼠腭裂。1H-MRS可测定代谢产物有胆碱复合物(tCho) ，脂质（Lipid），肌酸复合物(Cr) ，肌醇(MI) 、牛磺酸（Tau）等。70和100mg/kg维甲酸灌胃组可见胆碱明显增高（P0.05），其他代谢产物的变化无显著性差异（P0.05）。结论：本研究在国内外首次报道了在体胎鼠颌面部氢质子波谱成像研究，在胚胎正常颌面部发育和疾病的诊断方面有重要的价值，利用核磁共振频谱技术有助于进一步了解颌面部畸形的发生机制。 关键词：MRS；维甲酸；颌面部畸形；腭裂；胆碱 颌面发育过程错综复杂，包括细胞群体内细胞的迁移、诱导、增殖及凋亡。在这个过程中任何外界致畸因子的作用或自身某些基因突变引起的表达异常都有可能引起颌面畸形的发生。[1]先天性唇腭裂是一种较为常见的先天性颌面部发育畸形，世界范围内的发生率 1/600。[2]目前广泛接受的分类是病原学上将唇腭裂分为非综合征性唇腭裂和综合征性唇腭裂，其中非综合征性唇腭裂分为唇裂伴有或不伴有腭裂、单纯腭裂。综合征性唇腭裂的病因一般较明确，认为与其自身的特殊基因组合有关，非综合征性唇腭裂是最常见的先天发育畸形，占整个颌面裂畸形的70％以上。绝大多数非综合征性唇腭裂，其发病因素复杂，是由遗传和环境因素相互作用所致的多基因多因素遗传性疾病。目前普遍接受的观点认为是由多种基因和环境因素共同作用的结果。[3]基因、环境之间的相互作用也受到广泛关注，包括母亲吸烟、饮酒、服用抗癫痫药物、止吐药物、孕前孕期服用维生素、母亲的新陈代谢情况和接触农药等。[2,4,5]唇腭裂患儿除了有形态的异常外，还会有诸如语音、心理、听力、咀嚼能力、颌骨发育以及社会适应能力等多方面的不足。[3] 目前，颌面畸形的研究方向主要集中在基因组学、蛋白组学上。例如，研究发现IRF6、TGFBs、TGFBRs 、TGFA、MSX1、 BMP4、F0XE1 、FGFs 、GFRs、SUMOI、WNTs等的突变都可以导致颌面畸形的发生。[6,7]然而，在系统生物学的代谢层面上，研究甚少。代谢组学(metabonomics) 由英国学者Nicholson等人于 1999年首次提出，近年来发展迅速，并已成为国际研究的热点。[8]代谢组学是众多组学中的一种，它是随着生命科学的发展而发展起来的，是通过考察生物体系受刺激或扰动后（如将某个特定的基因变异或环境变化后)，其代谢产物的变化或其随时间的变化，来研究生物体系的一门科学。在疾病诊断、药物开发、新药毒性评价以及植物和微生物的研究中已经得到成功的应用。核磁共振波谱(Magnetic Resonance Spectroscopy MRS）是利用核磁共振基本成像原理及其化学位移（δ值，单位ppm）和自旋藕合现象测定生物体内化学物及体内能量代谢的一种检测技术，现己经是代谢组学研究的重要技术手段。MRS能无创性地研究活体器官、组织代谢、生化变化及物质定量分析的方法，是一种在活体无损伤条件下检测细胞水平代谢变化的非侵入性技术。[9]在代谢层面，有学者以地塞米松诱导C57BL/6J小鼠腭裂，取孕鼠肝组织水溶性提取液及孕鼠外周血液，利用核磁共振技术测定其内源性小分子代谢产物，通过主成分分析方法测定代谢物组成成分变化，发现实验组与对照组代谢产物有显著差异。[10]在此基础上又有在维生素B12拮抗剂的保护下探测血浆代谢物组的变化的研究。亦有学者收集唇腭裂患儿的血液及尿液进行核磁共振波谱扫描，探究和正常儿童的尿液及血液中代谢物的差异。[11] 然而，颌面部的发育具有时间性、空间性。[1,12,13]倘若能在颌面发育过程中探究颌面部本身的代谢