3_高压液相色谱(HPLC)方法建立总绪论探究.pptVIP

* 2.2.1 在初步方法建立中使用什么样品? -使用大约5%降解度的降解样品 -含有1-2%单个“重要的”相关物质的药品样品 高浓度相关物质（检测性） 保持相对的基质、活性成分和降解产物的浓度 * 2.2.2 分离模式 反相，离子对(C18, C8, phenyl, CN, amino) 常规 (Si, amino, CN) – 使用有机/非水溶剂 HILIC 常规 (Si) – 使用水/有机流动相 * 为什么使用反相 HPLC? 与有机或有机与水相条件 处理疏水 (?k’) 和亲水 (?k’) 被分析物 处理酸、碱和中性被分析物 * 2.2.3 柱化学 反相色谱的稳定相 C8, C18, NH2, CN, Phenyl 粒子大小 碳充填 孔大小 * 现代柱化学 超纯硅胶 为不同pH范围设计的柱子 充填有极性基团的稳定相 * 用于初步方法建立的HPLC柱子 使用 3.5um, 15cm, 用过的 HPLC column 为什么? * 2.2.4 初步方法建立的步骤 1. 调整 k’ (范围从 0.5 到 20) 2. 检查尾液 (调整 pH, 使用为碱性化合物设计的柱子，调整器) 3. 按照重要的相关物质调整专属性（梯度、不同的有机溶剂、温度、不同的柱子） * Section 2.2.5 离子对 HPLC 方法 * 离子对试剂 改进强亲水化合物的滞留时间 控制对混合物中酸性、碱性和中性分子的选择性 离子对HPLC方法有什么缺陷? * 离子对试剂类型 烷基磺酸钠（Sodium alkyl sulphonate：Na+ R-SO3-) 与碱性化合物形成络合物 (B+) 四烷基溴化胺（Tetra- alkyl ammonium bromide： R4-N+ Br -) 与酸性化合物形成络合物 (A-) * 建立离子对初步方法的步骤 1. 调整 k’ (范围从0.5 到 20) 2. 检查尾液 (调整pH, 不同柱子、调整器） 3. 调整专属性 (梯队、不同的有机溶剂、温度、不同的柱子) 4. 在专属性能不佳的情况下，增加离子对和离子对浓度 * 2.2.6 计算机辅助方法建立 特点： 采用线性梯度进行2-3次试验 为所有的相关物质输入滞留时间数据和色谱条件。 预测其它HPLC 条件下的分辨率 * 2. 方法建立计划 2.3 样品制备程序 (10%) 建立一个合适的药品样品制备程序 * 注意要点 样品浓度（定量极限） 样品组成 (精度) 样品制备程序 (程式化) 样品溶剂 (准确度) * 2. 方法建立计划 2.4 标准化 (10%) 确定适当的标准化方法，在计算中使用相对响应因子 更多详情见验证章节 * 2. 方法建立计划 2.5 最后方法优化/程式化 (20%) 鉴别方法的“缺陷”，通过实验设计优化方法。了解不同条件、不同仪器设置和不同样品条件下的方法效用。 * 2.5 方法建立中的统计学 概要: 讨论各种统计技术和提供运用这些技术的基础知识 宣示各种方法学的优越性和实用性 确定在方法建立和验证过程中和如何和在何处运用统计思维 * 2.5.1 Ad Hoc技术的缺点 Ad Hoc 技术 非系统方法 一次一个变量实验 问题： 对过程行为（例如相互作用）缺乏足够的解释和合格化 资源使用效率低 不能区别重要和重要的效应 数据不易分析 * 主要应用 实验设计 如果操作的话，什么因子可以造成的变化，并且导致更优化的或更加期待的响应？ 方法优化 (样品制备、色谱) 变量组元 每一个变量源给实验中总的变量贡献是什么？ 方法精度（样品制备方式） * 术语 响应 (例如相关物质百分比、分辨率百分比、尾液因子百分比) 测量最后结果的数量 因子 ( 例如温度、pH、流速) 可以控制的那些能影响关键响应的实验方面 连续因子 ( 例如温度、pH、时间等) 类别因子 ( 例如分析员、仪器等) 主要效应 一个因子的主要效应是指当该因子从一个设定水平改变到另外一个水平时可以预见的响应差别 * 实验设计 的3 个层次 Plackett- Burman PB设计 确定关键因子 Factorial Design FD设计 研究关键因子间的互相作用 优化方法的功效 Fractional Factorial Design FFD设计 使FD设计简化 介于PB设计和FD设计之间的一种设计 * 2.6 方法建立计划 2.6 方法验证 (30%) 按照注册法规要求完成方法验证 人有了知识，就会具备各种分析能力， 明辨是非的能力。 所以我们要勤恳读书，广泛阅读， 古人说“书中自有黄金屋。 ”通过阅读科技书籍，我们能丰富知识， 培养逻辑思维能力； 通过阅读文学作品，