木黄酮对体外培养的HSCT6细胞基质金属蛋白酶.docVIP

　　木黄酮对体外培养的HSCT6细胞基质金属蛋白酶 【摘要】 目的 以雌二醇(E2)作为阳性对照，观察植物雌激素木黄酮(GST)对体外培养的HSCT6细胞基质金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1)基因表达的影响。方法 E2 0.1μmol/L浓度作为阳性对照，GST 0.5、5、50μmol/L浓度分别作用于HSCT6细胞36h，以RTPCR方法测定其对HSCT6细胞TIMP1基因表达的影响。结果 E2浓度组和GST各浓度组均对HSCT6细胞TIMP1基因表达有明显的抑制作用，其中GST各浓度组作用呈一定剂量相关性。结论 GST各浓度组均可抑制HSCT6细胞TIMP1基因表达水平，从而促进胶原降解，可能是其抗肝纤维化的作用机制之一。 【关键词】 肝纤维化 雌二醇 植物雌激素木黄酮 基质金属蛋白酶抑制因子 肝星状细胞 　　ABSTRACT: Objective By using estradiol (E2) as positive control to observe the effects of genistein (GST) on the matrix metalloproteinase inhibitor 1 mRNA levels of HSCT6 cell in vitro. Methods HSCT6 cells ol/L and GST 0.5-50μmol/L for 36 hours. The TIMP1 mRNA levels easured by the quantitative reversetranscription polymerase chain reaction (RTPCR). Results The TIMP1 mRNA levels of HSCT6 cells at different concentrations of E2 and GST al control (Plt;0.01). P1 mRNA levels. Conclusion The antifibrotic mechanism of GST is partly due to its doRNA levels of HSCT6 cells. 　　KEY P)的表达，使基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinase, MMP)的活性增强，抑制肝维化的产生[13]。而木黄酮(genistein, GST)作为植物雌激素的一种主要成分具有多种生理功能，木黄酮在结构上与哺乳动物的雌激素雌二醇相似，具有雌激素的活性基团二酚羟基[4]，其化学结构决定化学性质，所以GST具有类雌激素活性等多种生物活性。它不仅是一种有效的抗氧化剂，还是一种有效的酪胺酸蛋白激酶抑制剂。本实验以E2作为阳性对照，应用RTPCR方法进一步观察GST对体外培养的HSCT6细胞TIMP1基因表达的影响。 　　1 材料与方法 　　1.1 细胞系 肝星状细胞系HSCT6由美国加利福尼亚旧金山总医院肝病研究中心Frideman教授、上海第二军医大学张俊平教授惠赠。系SV40转染的大鼠肝星状细胞，具有活化的HSC表型[5]。 　　1.2 药品、试剂与仪器 木黄酮和雌二醇冻干粉购自美国Sigma公司；含酚红的高糖型DMEM液体培养基、无酚红的高糖型DMEM液体培养基购自Hyclone公司；总RNA提取试剂盒、逆转录盒、Markers和琼脂糖均为Promega公司产品；梯度PCR仪为美国Sigma公司产品；采用Bandscan图象分析软件。 　　1.3 方法 　　1.3.1 药液配制 GST冻干粉5mg以DMSO(370μL)溶解，制成浓度为50mmol/L的贮存液，使用前新鲜配制，用含5%体积分数血清的无酚红的高糖型DMEM培养液稀释至0.5、5、50μmol/L浓度；E2冻干粉3mg以DMSO(8760μL)溶解，制成浓度为1mmol/L的贮存液，使用前新鲜配制，用含5%体积分数血清的无酚红的高糖型DMEM培养液稀释至0.1μmol/L浓度，均4℃避光保存。 　　1.3.2 细胞培养 HSCT6细胞于37℃快速复苏，用含10%体积分数胎牛血清的含酚红高糖型DMEM培养液接种于50mL细胞培养瓶中，在37℃，5%体积分数CO2及饱和湿度下培养，隔天换液，每日于倒置显微镜下观察细胞形态和生长状况，待细胞生长至80%-90%密度时，给予传代，取生长状态良好细胞用于实验。 　　1.3.3 药物干预 取对数生长期培养细胞HSCT6，待细胞生长融合后，加入GST或E2，以不同浓度分组(GST不同浓度组：0.5μmol/L；5μmol/L；50μmol/L，E2浓度组：0.1μmol/L)，E2组作为阳性对照组，同