耐药蛋白差异性表达与肿瘤个体化化学治疗关系的研究.docVIP

　　耐药蛋白差异性表达与肿瘤个体化化学治疗关系的研究 【摘要】 肿瘤细胞多药耐药的产生是导致肿瘤化疗失败的主要原因。耐药蛋白在不同个体肿瘤组织中的表达具有差异性。耐药蛋白表达特征是判断恶性肿瘤化学治疗敏感性的一个极重要的指标。研究并检测这种差异性表达，选择合理的个性化治疗方案，对提高肿瘤化学治疗成功率具有重要临床意义。 【关键词】 多药耐药相关蛋白质类·抗药性, 肿瘤·抗肿瘤联合化学治疗方案 　　耐药蛋白是耐药相关基因表达产物，主要包括P糖蛋白（P-gp）、多药耐药相关蛋白（MDR-associated protein，MRP）、肺耐药蛋白（lung resistance-related protein, LRP）、拓扑异构酶Ⅱ（TopoⅡ）、谷胱甘肽S转移酶π（GSTπ）等。多药耐药基因及其表达产物通过介导药物外排，细胞内解毒酶活性的改变等机制在肿瘤细胞多药耐药（multiple drug resistance，MDR）机制中发挥重要作用。 　　耐药蛋白的表达具有差异性，耐药蛋白表达特征是判断恶性肿瘤化疗敏感性的一个极重要的指标。早期明确耐药蛋白在不同个体的肿瘤组织中的表达差异，是选择适宜的个体化治疗方案、避免化疗失败、提高患者生存率的重要环节。　　 1　耐药蛋白在肿瘤组织中的表达 　　研究证实，目前已发现的耐药蛋白在肝癌组织中均呈高表达状态，在肝癌组织、癌旁组织和正常组织中的表达往往呈现逐渐减低的梯度趋势。Tsuda 等［１］研究结果表明P-gp在肝细胞癌（hepatocellular carcinoma，HCC）中的阳性表达率为53.6％，在癌旁组织中的表达率为33.9％，均高于正常肝组织。我中心的研究也显示，MRP和LRP在肝硬化、癌旁肝组织及术前未化疗的HCC组织中均有不同程度的表达，且HCC组织中表达的明显高于肝硬化、癌旁肝组织［２-３］。TopoⅡ与GST-π均参与肝癌化疗耐药。研究报道，GST-π在肝癌组织中的阳性率为71.4%，TopoⅡ阳性率为31.4%，且门脉癌栓患者TopoⅡ的阳性表达率高于无门脉栓者（Plt;0.05）［4］。 　　P-gp表达水平与肺癌耐药性关系尚存在争议。多数学者认为P-gp与肺癌多药耐药无关，也有学者认为二者间存在明显的关系［５-６］。研究发现LRP在肺癌组织中广泛高水平表达，而在正常肺组织内表达水平却很低，形成很大的表达差异，从而使LRP成为肺癌化疗中判别个体敏感度的理想指标［7］。MRP基因在肺癌组织中的表达水平较高，且在肺鳞癌中的阳性表达率明显低于腺鳞癌和腺癌［８］。 　　P-gp是目前与胃癌化疗敏感性关系最密切的耐药因子之一，其表达与胃癌的组织学类型相关。P-gp和LRP在高、中分化腺癌中的表达要高于低分化腺癌，与临床胃低分化腺癌化学治疗效果较好相符合［９］。GST-π、TopoII在胃癌组织中的表达显著高于其周围正常黏膜组织［１０-１１］，提示二者均是参与胃癌化学治疗耐药的重要因子。 　　耐药蛋白在乳腺癌组织中的表达水平普遍较高。Tsukamoto等［１２］检测了94例乳腺癌标本，发现P-gp阳性表达率为37. 2%；Lacave等［１３］ 的研究结果显示，MRP1在乳腺癌患者的表达率为94.6％；而 Izquierdo等［１4］报道LRP在乳腺癌组织中表达率为83％。 　　GSTπ、P-gp和TopoⅡ的高表达与肿瘤转移潜能、化学治疗效果差、低缓解率、高复发率、生存期短等有关，可作为评价肿瘤患者预后的指标［１５］；而LRP、MRP则可能与乳腺癌的淋巴结转移有关［１６-１７］。 2　耐药蛋白的检测 　　如何获知肿瘤患者体内耐药蛋白的表达情况是关系到能否将耐药蛋白研究应用于临床的关键问题。针对不同类型的患者，采用不同的方法。 2.1　手术患者耐药蛋白的测定　对于可以获取肿瘤组织的临床手术患者，检测MDR基因的手段较多，主要是分子、蛋白质和细胞三个水平。 　　分子水平方面主要是检测MDR1 mRNA的表达水平。常用的方法包括：RT-PCR、原位杂交、Slot—blot（SB），Northern blot（NB）、Rnase保护实验等。其中因RT-PCR操作简便安全，特异性及敏感性高而在临床应用较多，是目前检测肿瘤多药耐药性的一种较理想的检测方法。蛋白质水平临床上主要应用的是免疫组织化学法直接检测组织中耐药蛋白表达量。此外，流式细胞仪在监测肿瘤细胞耐药基因表达产物水平的应用日趋广泛。细胞水平上可采用荧光染料如若丹明123或具有天然荧光的柔红霉素与细胞共同培养，用荧光分光度计测定单个细胞内药物浓度，帮助判定细胞的耐药程度。 　　了解手术患者耐药基因表达检测方法有多种，各具其优缺点。对于高表达的P-gp，各种检测方法所得的结果基本一致；对于低表达的P-