通脉口服液对实验性糖尿病肾病模型大鼠肾脏病理及转.docVIP

　　通脉口服液对实验性糖尿病肾病模型大鼠肾脏病理及转 【摘要】 【目的】观察通脉口服液对实验性糖尿病肾病（DN）模型大鼠肾脏病理及转化生长因子β1(TGFβ1)的影响。【方法】选用SD雄性大鼠，随机分为正常对照组（8只），腹腔注射等剂量无菌柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液，饲普通饲料；其他动物（32只）为造模组给予链脲佐菌素(STZ，剂量为55mg/kg)单次腹腔注射，隔日饲高脂饲料；4周后筛选DN成模大鼠共21只，随机分为模型组（11只）、通脉组（10只）。通脉组给予通脉口服液（剂量为2.5 g·kg-1·d-1)，正常对照组及模型组给予生理盐水灌胃，饲料同前。6周后处死大鼠取肾组织，光学显微镜及电子显微镜下观察肾脏组织形态及超微结构变化，测量肾小球截面积(AMG)、细胞外基质截面积(AMM)、肾小球基底膜(GBM)厚度，计算AMM/AMG比值；同时采用免疫组化法测定肾组织TGFβ1蛋白表达。【结果】肾组织病理形态学：通脉组系膜区增宽、基底膜增厚及肾小管上皮细胞空泡变性等均较模型组明显减轻； 通脉组AMM/AMG值较模型组降低；GBM厚度较模型组变薄（均P＜0.001）；TGFβ1主要定位在肾小管及间质处，肾小球表达较弱， 通脉组免疫组化染色面密度及积分光密度均较模型组降低（P＜0.001）。【结论】益气活血中药复方通脉口服液可能通过抑制肾组织TGFβ1表达，减轻肾脏病理损害，发挥对DN的肾脏保护作用。 【关键词】 通脉口服液/药理学； 糖尿病肾病/中药疗法； 肾组织/病理学； 肾组织/超微结构； 疾病模型，动物； 大鼠 糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）是糖尿病最常见的慢性并发症之一。在我国DN约占终末期肾病的15%，且以每年8%～10%的速率递增［1］。有关DN的防治研究一直是医学研究的重点。 DN的主要病理学改变是肾小球基底膜(GBM)增厚及系膜区基质增生，这些变化的组织学基础是细胞外基质(ECM)不适当的积聚［2］。转化生长因子β(TGFβ)是DN发生、发展中最重要的一个细胞因子，在人类肾脏中以β1为主。TGFβ1可以在基因表达、转录及其他多方面调节ECM成分的生成及降解，诱导肾脏肥大［3］。本试验观察了通脉口服液对DN模型大鼠肾脏病理及TGFβ1蛋白表达的影响，现报导如下。 1 材料与方法 1.1 动物 SPF级雄性SD大鼠40只，体质量260～280g（广州中医药大学实验动物中心提供，合格证号：0017114）。 1.2 药物、试剂与仪器 通脉口服液为广东省中医院自制制剂，批号链脲佐菌素（STZ）由美国Sigma公司提供，用时以0.1mol/L（pH 4.2)无菌柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液配制成10mg/L的STZ溶液，即配即用；免疫组化SP二步法测大鼠肾组织TGFβ1用试剂盒由博士德生物工程有限公司提供；EICACUT型超薄切片机为德国LEICA公司产品；EclipseE800型光学显微镜为日本Nikon公司产品；JEM1200EX型透射电镜为日本电子株氏会社产品；HMIAS2000型高清晰度彩色病理图文分析系统为武汉千屏影像技术有限责任公司产品。 1.3 糖尿病肾病大鼠模型的复制 ［4］ 取SPF级SD雄性大鼠40只，自由饮水和进食3d以适应环境后随机分为正常对照组（8只）、造模组（32只）。造模组在禁食不禁水24h条件下，单次腹腔注射 STZ（剂量为55mg/kg），禁食不禁水6h，72h后尾静脉取血测血糖，取空腹血糖（FBG）值≥16.8mmol/L大鼠继续造模，隔日饲以高脂饲料；正常对照组同等条件下腹腔注射同等剂量无菌柠檬酸—柠檬酸钠缓冲液，饲以普通饲料。4周末于尾静脉采血测血糖，代谢笼法测24h尿蛋白定量，以FBG值≥16.8mmol/L，24h尿蛋白定量≥20mg判定为DN大鼠造模成功。 1.4 分组与给药 共有21只大鼠达到DN模型标准。随机分为模型组11只、通脉组10只。造模过程中，大鼠共死亡4只，原因考虑为STZ毒性及高血糖。 大鼠的用药量根据成人常用药量及人体与大鼠体表面积换算。正常对照组、模型组以生理盐水10mL·kg-1·d-1剂量灌胃；通脉组以通脉口服液2.5g·kg-1·d-1剂量灌胃（用时以生理盐水稀释浓度为0.25g/mL）。 1.5 观察指标 　　干预6周后共存活大鼠：正常对照组7只，模型组6只，通脉组7只。 1.5.1 光学显微镜检查及形态学检测结果判定标准 　　每组随机抽取6只大鼠肾组织制备标本，行过碘酸—雪夫反应 (PAS)染色，光镜下观察肾脏的组织形态学变化，400倍视野下，每张切片随机采集 20个肾小球图像，导入病理图文分析系统，测量肾小球截面积（AMG：肾小球在切片中的横截面积）、