③将目的基因导入受体细胞 - 9c55com.ppt

（三）“分子运输车” ——载体 2.将目的基因导入植物细胞 农杆菌转化法 显微注射法：植物原生质体 3.将目的基因导入动物细胞（受精卵） 显微注射技术（最多、最有效） 1.将目的基因导入细菌细胞 Ca2+处理，以增加细菌细胞壁的通透性。 将目的基因导入受体细胞的方法 花粉管导入法：植物受精卵 显微注射技术 提纯基因表达载体 体外显微注射入受精卵 受精卵移植 （四）筛选含有目的基因的受体细胞 例5、2008年诺贝尔化学奖授予了“发现和发展了水母绿色荧光蛋白”的三位科学家。将绿色荧光蛋白基因的片段与目的基因连接起来组成一个融合基因，再将该融合基因转入真核生物细胞内，表达出的蛋白质就会带有绿色荧光。绿色荧光蛋白在该研究中的主要作用 A．追踪目的基因在细胞内的复制过程 B．追踪目的基因插入到染色体上的位置 C．追踪目的基因编码的蛋白质在细胞内的分布 D．追踪目的基因编码的蛋白质的空间结构 例6. 大肠杆菌pUC118质粒具有氨苄青霉素抗性基因，某限制性核酸内切酶唯一切点位于该质粒的lacZ基因中。在特定的选择培养基中，若lacZ基因没有被破坏，则大肠杆菌菌落呈蓝色；若lacZ基因被破坏，则菌落呈白色。右图表示转基因操作过程。下列说法错误的是 A．作为受体大肠杆菌应不含氨苄青霉素抗性基因，以便于筛选 B．若大肠杆菌的菌落为蓝色，则质粒未导入大肠杆菌 C．培养基中除必需的营养物质外，还应加入适量氨苄青霉素 D．应选择白色菌落的大肠杆菌进行扩大培养 （五）目的基因表达和检测 检测目的基因是否控制合成相应的蛋白质（表达） 分子水平： 宏观水平： 检测生物是否表现目的基因所控制的相应性状 * 现代生物技术专题 基因工程 一、2012考纲要求： Ⅰ Ⅱ（去年是Ⅰ） Ⅰ （1）基因工程的诞生 （2）基因工程的原理和技术 （3）基因工程的应用 4—1　基因工程 Ⅰ：知道所列知识点的含义，并能够在试题所给予的相对简单的情境中识别和使用它们。 Ⅱ：理解所列知识与相关知识之间的联系和区别，并能在较复杂的情境中综合运用其进行分析、判断、推理和评价。 二、近三年试卷分析： （09浙江）3．下列关于基因工程的叙述，错误的是 A．目的基因和受体细胞均可来自动、植物或微生物 B．限制性核算内切酶和DNA连接酶是两类常用的工具酶 C．人胰岛素原基因在大肠杆菌中表达的胰岛素原无生物活性 D．载体上的抗性基因有利于筛选含重组DNA的细胞和促进目的基因的表达 二、近三年试卷分析： （10浙江）2．在用基因工程技术构建抗除草剂的转基因烟草过程中，下列操作错误的是 A．用限制性核酸内切酶切割烟草花叶病毒的核酸 B．用DNA连接酶连接经切割的抗除草剂基因和载体 C．将重组DNA分子导入烟草原生质体 D．用含除草剂的培养基筛选转基因烟草细胞 二、近三年试卷分析： （11浙江）6.将 ada（腺苷酸脱氨酶基因）通过质粒pET28b导入大肠杆菌并成功表达腺苷酸脱氨酶。下列叙述错误的是 A． 每个大肠杆菌细胞至少含一个重细胞质粒 B． 每个重组质粒至少含一个限制性核酸内切酶识别位点 C． 每个限制性核酸内切酶识别位点至少插入一个ada D． 每个插入的ada至少表达一个腺苷酸脱氨酶分子 一、基因工程的基本工具 准确切割DNA的工具（“分子手术刀”） DNA片段的连接工具（“分子缝合针”） 基因转移工具（“分子运输车”） 基因的大小以纳米（分子水平）计算，要对它进行剪切、拼接等操作，没有非常精细的工具是不行的。进行基因操作最少需要以下三种工具： 考点细化： 识别双链DNA 分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开。 微生物 4000种。 1、来源： 2、种类： 3、作用： 4、结果： 形成两种末端 （一） “分子手术刀” ——限制性核酸内切酶 黏性末端 平末端 大肠杆菌(E.coli)的一种限制酶能识别GAATTC序列，并在G和A之间切开。 EcoRⅠ酶 什么叫黏性末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线两侧切开时，被限制酶切开的DNA两条单链的切口，带有几个伸出的核苷酸，他们之间正好互补配对，这样的切口叫黏性末端。 什么叫平末端？ 当限制酶从识别序列的中心轴线处切开时，切开的DNA两条单链的切口，是平整的，这样的切口叫平末端。 DNA连接酶可把黏性末端之间的缝隙“缝合”起来，即把梯子两边扶手的断口连接起来，这样一个重组的DNA分子就形成了。 （二）“分子缝合针” ──DNA连接酶 例1．关于下列黏性末端的描述，正确的是 A．限制性核酸内切酶切割DNA形成④时需要脱去2个水分子 B．DNA连接酶与DNA聚合酶均能作用于上述黏性末端 C．①和④的黏性末端不同，一定是由不同的限制性核酸内切酶切出 D．