西瓜花叶病毒外壳蛋白基因的克隆与原核表达.pdf

第 36 卷 　第 4 期 ( ) 河南师范大学学报 自然科学版 Vol . 36 　N o. 4 2008 年 7 月 　　　　　　 　 ( ) 　　　　　 　　 J ou rnal of H enan N orm al Uni ve rs i ty N at u ral S cience J uly . 2008 　　文章编号 :1000 - 2367 (2008) 04 - 0 117 - 03 西瓜花叶病毒外壳蛋白基因的克隆与原核表达 1 1 2 张建新 ,刘起丽 ,吴云锋 ( 1. 河南师范大学 生命科学学院 ,河南 新乡 453007 ;2 . 西北农林科技大学 植保学院与陕西省农业分子 生物学重点实验室 ,陕西 杨凌 7 12 100) ( ) ( ) 摘 　要 :利用 R TPCR 方法获得了西瓜花叶病毒 WMV 陕西分离物外壳蛋白 CP 基因 ,大小为 843 bp . 将 CP 基因克隆到 p MD 18T Simp le Vector ,测序分析发现与各个国家 CP 核苷酸和氨基酸同源性分别为 93 . 0 %～ 95 . 0 %和 96 . 5 %～98 . 6 %. 将 CP 基因定向插入 EcoR I/ S al I 切开的 p E T30a 中 , 构建了原核表达载体 p E T30 WCP ,转化大肠杆菌BL 2 1. 经 IP T G 诱导 2～8 h 后 ,成功表达了分子量约为 37 kD 的 CP 蛋白. 通过不同时间诱导发 现 ,加入 IP T G 4 h 后蛋白开始表达 ,8 h 后表达量比较大. 以诱导的蛋白为抗原免疫家兔 ,制备了 WMV CP 抗血清 , EL ISA 法测其效价为 1/ 6 400 ,West ern blot 分析能与 CP 发生血清学反应. 关键词 :西瓜花叶病毒 ;外壳蛋白;原核表达 ;抗血清 Q939 . 46 ; S432 . 4 　　　　　　　　　　　 A 中图分类号 : 文献标识码 : ( ) 西瓜花叶病毒 W aterm el on m os aic v i r us ,WMV 是马铃薯 Y 病毒属重要成员 ,此病毒被多种蚜虫以非 持久方式传播. 1954 年 ,美国的 A nder son 等人[ 1 ] 首次在 Florida 的西瓜上发现该病毒 , 1965 年 Webb 和 Scot [2 ] 在西瓜上最早分离得到该病毒. 自然条件下 WMV 可侵染葫芦科 、藜科 、豆科等 27 科 170 多种植物 , ( ) ( ) ( ) 常与黄瓜花叶病毒 CMV 、小西葫芦黄化花叶病毒 Z YMV 、南瓜花叶病毒 SqMV 、等病毒复合侵染 ,近 几年西瓜病毒病的发生呈上升趋势 ,我国大部分地区因西瓜病毒病造成的损失为 30 %～50 % ,甚至绝产 , 由 WMV 引起的病毒病已经成为制约西瓜高产稳产最主要的因