蚯蚓纤溶酶在大肠杆菌中的克隆与表达 - 河北大学学报(自然科学版).pdfVIP

第 卷 第 期 河北大学学报（自然科学版） ol.22 No.4 22 4 年 月 （ ） DeC.2002 2002 12 Journalof ~ebei Universit NaturalSCienCeEditiony ############################################################### 蚯蚓纤溶酶在大肠杆菌中的克隆与表达 赵晓瑜，静天玉，王彦芳，王会文，李亚东 （河北大学 生命科学学院，河北 保定 071002） 摘 要：根据蚯蚓纤溶酶最佳组分的N -末端氨基酸序列设计简并引物，以蚯蚓CDNA为模板，获得该 组分蛋白质的部分编码序列（ ， 登陆号） 相似性分析表明，该序列与 和 AF432224 GenBank .BLAST U25643 的部分序列相似性达 ，根据 ’和 ’末端保守序列设计引物，经 获得全长 编码序 U25648 91% 5 3 PCR CDNA 列 将该序列插入. pTBY-11质粒，转化大肠杆菌，表达蛋白以包含体形式存在. 关键词：蚯蚓纤溶酶；分子克隆；表达基因；大肠杆菌 中图分类号： 文献标识码： 文章编号 （ ） @787 A 1000-1565 2002 04-0392-04 ［ ］ 蚯蚓纤溶酶（ ， ）是一类多组分纤维蛋白水解酶 1!6 ，由于它们具有 EarthWorm Fibrinol tiCEnz mes EFEy y 良好的纤溶酶活性而被开发成口服溶栓药物.为了近一步提高该药的特异性，笔者利用亲和层析技术从蚯蚓 ［］ ［，］ 2 6 8 （ ）匀浆液中分离出 个 活性组分 ，对各组分进行了分离纯化和分析 ，并测定 Eisenia foetida 11!13 EFE 了其中活性最佳组分的N -末端氨基酸序列 本文则以该序列为依据，设计了简并引物，从蚯蚓. CDNA 中克 隆到该组分的编码序列，构建了表达载体，并在大肠杆菌中获得表达. 1 材料 蚯蚓（ ）； 提取试剂盒、 合成试剂盒、GEM-T eas 载体、 连接酶、限制性 Eisenia foetida RNA CDNA p y T4 内切酶均为 公司产品； TM 为 公司产品 Prome a IMPACT -CM BioLab . g 2 方法 蚯蚓总 ， ， 的制备，按试剂盒说明书进行； 扩增，用空气热循环仪（安普公司， RNA mRNA CDNA PCR